蜂蜜中鏈霉素和雙氫鏈霉素的測(cè)定

瀏覽次數(shù)：2541　發(fā)布日期：2022-5-6　來(lái)源：逗點(diǎn)生物官方微信公眾號(hào)

鏈霉素和雙氫鏈霉素屬于氨基糖苷類抗生素，對(duì)革蘭氏陰性菌具有抑菌活性，可以預(yù)防多種動(dòng)物疾病。在養(yǎng)蜂行業(yè)中，鏈霉素和雙氫鏈霉素能夠有效地治療蜜蜂的腐蛆病，但由于管理和使用的不科學(xué)，常造成蜂產(chǎn)品中該類物質(zhì)的殘留。

本實(shí)驗(yàn)參考國(guó)標(biāo)BJS 202103,對(duì)樣品前處理進(jìn)行優(yōu)化后，建立了一個(gè)穩(wěn)定可靠，回收率高，且適合動(dòng)物源性蜂蜜中鏈霉素和雙氫鏈霉素殘留量測(cè)定的SPE-UPLC-MS/MS方法。

Copure® HLB，60 mg/3mL

1、樣品提取

準(zhǔn)確稱取5 g試樣于50 mL離心管中，加入10 mL 提取液（含2 %三氯乙酸的磷酸鹽緩沖溶液），渦旋混勻1 min，超聲提取10 min，再加入10 mL提取液并定容至25 mL，渦旋混勻1 min后超聲提取5 min，在10000 r/min離心5 min，待凈化。

2、樣品凈化

活化：依次用3 mL甲醇，3 mL水活化Copure® HLB固相萃取小柱；

上樣：取5 mL待凈化液至已活化好的固相萃取小柱；

淋洗：用2mL水淋洗固相萃取小柱兩次，抽干小柱；

洗脫：用1 mL 甲酸-乙腈-水（2:10:88，v:v:v）溶液洗脫，收集洗脫液，用2 %氨化乙腈1 mL定容至2 mL，渦漩，過(guò)濾膜，上機(jī)測(cè)試。

3、標(biāo)曲制備

選同類型空白樣品，依次加入適量混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，按照樣品提取和凈化的步驟進(jìn)行操作，配制成上機(jī)濃度分別為2.5 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

4、儀器條件

【液相部分】

色譜柱： Hilic

2.1 mm×100 mm,2.7 μm

流動(dòng)相：A：5 mmol/L乙酸銨溶液（含0.3 %甲酸） B：乙腈（含0.3 %甲酸）

流速：0.3 mL/min

柱溫：35℃

進(jìn)樣量：10 μL

洗脫程序：梯度洗脫表1