qPCR實驗之核酸提取MIQE明確的要點詳解

前言

MIQE是描述評估qPCR實驗所需的最小信息，該指南是稿件投稿時需要同時提交的一個清單。通過作者提供相關(guān)的實驗條件和實驗特點，審稿人可以評價實驗所用方法的可靠性。另外提供詳細的實驗所用試劑、序列和分析方法，其他研究人員可以利用這些信息進行重復(fù)實驗。

對于核酸提取MIQE有明確要求兩點——實驗組與對照組的定義及每一組的樣本數(shù)量。

無論采用手工法還是試劑盒，只要符合MIQE的要求并實現(xiàn)良好的可操作性和重現(xiàn)性，就是合理客觀的技術(shù)方法。MIQE在該部分操作中的要求又分為兩大塊——樣本描述和核酸提取方法。

樣本描述

▶  樣本采集和處理的方法描述

▶ 樣本的來源描述（宏觀解剖還是激光顯微切割）

▶  樣本是如何即時處理（保存條件及時間）

▶  冷凍樣本的冷凍方法和時間

核酸提取

采取的提取方法：

1）手工法：小批量經(jīng)濟型

2）自動化儀器：大批量高效型
 

按獲取的物質(zhì)可分為DNA和RNA：

◆ DNA：適合拷貝數(shù)變異、SNP分析等實驗

◆ RNA：適合基因表達、長非編碼RNA等實驗

圖源：網(wǎng)絡(luò)，侵刪
 

按提取方法分為化學(xué)法和機械破碎法：

◆ 化學(xué)法：適合采用堿裂解法的樣本，質(zhì)粒提取、菌類的提取

◆ 機械破碎法：比較堅硬有一定韌性的物質(zhì)，動植物組織

更推薦使用合適的商品化的核酸提取試劑盒，流程標準化程度更高，質(zhì)量更容易得到保證，這樣在方法描述時可以更簡單一些，直接引用試劑盒的生產(chǎn)廠家、貨號和名稱即可。

DNA酶或RNA酶的處理細節(jié)：

基因表達實驗中，RNA模板如果存在DNA污染，會嚴重干擾最后的結(jié)果。因此提取RNA時要加入DNA酶將DNA消化掉，工作濃度、處理溫度和時間要加以說明，同時也要加入RNase抑制劑提供保護。使用柱純化試劑盒提取RNA時也可以在柱上進行DNA消化。同樣的，提取DNA時也要將RNA消化掉，盡管殘留RNA對DNA為模板的qPCR實驗影響小得多。

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☑  數(shù)據(jù)可靠性：連續(xù)1000次實驗后，結(jié)果高度一致。

☑  應(yīng)用靈活性：提供多種qPCR應(yīng)用分析。

☑  流程智能化：中英文用戶界面，觸控操作，可多機聯(lián)用。

☑  在線便捷性：主機可獨立運行qPCR程序，數(shù)據(jù)可USB、Wi-Fi等網(wǎng)絡(luò)傳輸。