C57小鼠皮膚成纖維細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法

      1. 將實(shí)驗(yàn)小鼠脫頸處死，75%乙醇浸泡5min，固定，備皮，取背部皮膚至于含雙抗的冷PBS緩沖液中。

      2. 仔細(xì)剝離脂肪，血管等多余組織，PBS清洗，加胰酶消化1h。

      3. 分離真表皮，去除表皮后，PBS清洗3次。

      4. 將真皮部分于培養(yǎng)皿內(nèi)剪碎，加入適量胰酶，轉(zhuǎn)移至15ml離心管內(nèi)，37℃恒溫水浴消化1h。

      5. 消化結(jié)束后，加入H-DMEM完全培養(yǎng)基終止反應(yīng)，1000rpm離心5min，棄上清。

      6. PBS清洗一遍，離心棄上清。

      7. 將清洗后的組織塊均勻鋪于6cm培養(yǎng)皿內(nèi)，加入2ml完全培養(yǎng)基，37℃，5%CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h。

     8. 第二天，補(bǔ)充培養(yǎng)基至5ml，繼續(xù)培養(yǎng)，3-4天后有細(xì)胞游出。

     9. 7天后已有大量細(xì)胞游出，去除組織塊并換新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

 

• 實(shí)驗(yàn)圖例

 

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