NK-92與NK-92MI細(xì)胞培養(yǎng)要點(diǎn)
NK-92細(xì)胞是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來(lái)的一株IL-2依賴型NK細(xì)胞株。NK-92MI細(xì)胞是轉(zhuǎn)染得到的源自NK-92細(xì)胞的IL-2非依賴的NK細(xì)胞株。親本細(xì)胞NK-92通過(guò)微粒體基因轉(zhuǎn)化法用逆轉(zhuǎn)錄病毒MFG-hIL-2載體攜帶的人IL-2cDNA進(jìn)行轉(zhuǎn)化。可能由于載體整合到基因組DNA中，轉(zhuǎn)化是穩(wěn)定的。這株細(xì)胞對(duì)很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性；鉻釋放試驗(yàn)顯示它能殺死K562細(xì)胞和Daudi細(xì)胞。NK-92細(xì)胞有以下特征：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54表面標(biāo)記陽(yáng)性；CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34和HLA-DR表面標(biāo)記陰性。其親本IL-2依賴的細(xì)胞株NK-92細(xì)胞及另一株同樣來(lái)源于NK-92細(xì)胞株的IL-2非依賴的細(xì)胞株NK-92CI都可從ATCC得到。NK-92MI細(xì)胞和NK-92CI細(xì)胞這兩個(gè)變種都包含、表達(dá)并合成hIL-2cDNA。NK-92MI細(xì)胞合成的IL-2水平比NK-92CI高，而親本細(xì)胞不合成表達(dá)。
NK-92培養(yǎng)要點(diǎn)
➊ NK-92細(xì)胞為懸浮生長(zhǎng)，大部分細(xì)胞聚集成團(tuán)，少數(shù)細(xì)胞分散，并且細(xì)胞間隙會(huì)有較多的死細(xì)胞和細(xì)胞碎片;
➋ NK-92細(xì)胞對(duì)IL-2敏感。培養(yǎng)基中IL-2降解，將導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差。IL-2在-20℃解凍后置于4℃冰箱保存，4℃保存不應(yīng)超過(guò)一周。配制好的新鮮培養(yǎng)基要盡快用完，建議每次使用前拿出來(lái)預(yù)熱，使用完畢后放回4℃冰箱保存；
➌ NK-92細(xì)胞對(duì)離心敏感。正常培養(yǎng)時(shí)，換液周期為2~3天，建議交替使用半量換液和離心換液法，即半量換液2~3次后，離心全量換液一次。盡量減少離心次數(shù)，細(xì)胞狀態(tài)不佳或細(xì)胞量少的時(shí)候，一般不建議離心；
➍ NK-92細(xì)胞對(duì)機(jī)械力較敏感。正常培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡量避免吹打力道過(guò)大。暴力吹打會(huì)使死細(xì)胞和細(xì)胞碎片增加。
➎ 正常培養(yǎng)時(shí)，NK-92細(xì)胞團(tuán)的間隙有部分死細(xì)胞和細(xì)胞碎片是正常的，如細(xì)胞碎片過(guò)多，可通過(guò)低速離心去除部分細(xì)胞碎片（800rpm,5min）。
➏ 血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。
➐ 細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)，聚集的細(xì)胞團(tuán)會(huì)逐漸增大，正常的細(xì)胞團(tuán)在顯微鏡下呈現(xiàn)白色透亮狀。若細(xì)胞聚集太多，出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)中部發(fā)暗時(shí)，可傳代；
➑ 細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液營(yíng)養(yǎng)要求很高，在正常培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)避免細(xì)胞團(tuán)塊太大，這會(huì)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)不足；細(xì)胞團(tuán)塊過(guò)大時(shí)，需要稍微吹散，注意控制吹打次數(shù)，不需刻意吹散成單個(gè)細(xì)胞。
➒ NK-92的傳代方法：將細(xì)胞團(tuán)用移液器輕輕吹散，均分到兩個(gè)瓶子里，每瓶再補(bǔ)充等量培養(yǎng)基。
➓ NK-92的凍存方法：細(xì)胞凍存的時(shí)候，細(xì)胞需要盡量分散，否則影響凍存效果。
➊ NK-92MI細(xì)胞為懸浮生長(zhǎng)，大部分細(xì)胞聚集成團(tuán)，少數(shù)細(xì)胞分散，并且細(xì)胞間隙會(huì)有較多的死細(xì)胞和細(xì)胞碎片；
➋ NK-92MI細(xì)胞對(duì)離心敏感。正常培養(yǎng)時(shí)，換液周期為2~3天，建議交替使用半量換液和離心換液法，即半量換液2~3次后，離心全量換液一次。盡量減少離心次數(shù)，細(xì)胞狀態(tài)不佳或細(xì)胞量少的時(shí)候，一般不建議離心；
➌ NK-92MI細(xì)胞對(duì)機(jī)械力較敏感。正常培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡量避免吹打力道過(guò)大。暴力吹打會(huì)使死細(xì)胞和細(xì)胞碎片增加。
➍ 正常培養(yǎng)時(shí)，NK-92MI細(xì)胞團(tuán)的間隙有部分死細(xì)胞和細(xì)胞碎片是正常的，如細(xì)胞碎片過(guò)多，可通過(guò)低速離心去除部分細(xì)胞碎片（800rpm,5min）。
➎ 血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。
➏ 細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)，聚集的細(xì)胞團(tuán)會(huì)逐漸增大，正常的細(xì)胞團(tuán)在顯微鏡下呈現(xiàn)白色透亮狀。若細(xì)胞聚集太多，出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)中部發(fā)暗時(shí)，可傳代；
➐ 細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液營(yíng)養(yǎng)要求很高，在正常培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)避免細(xì)胞團(tuán)塊太大，這會(huì)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)不足；細(xì)胞團(tuán)塊過(guò)大時(shí)，需要稍微吹散，注意控制吹打次數(shù)，不需刻意吹散成單個(gè)細(xì)胞。
➑ NK-92MI的傳代方法：將細(xì)胞團(tuán)用移液器輕輕吹散，均分到兩個(gè)瓶子里，每瓶再補(bǔ)充等量培養(yǎng)基。
➒ NK-92MI的凍存方法：細(xì)胞凍存的時(shí)候，細(xì)胞需要盡量分散，否則影響凍存效果。
NK-92培養(yǎng)要點(diǎn)
➊ NK-92細(xì)胞為懸浮生長(zhǎng)，大部分細(xì)胞聚集成團(tuán)，少數(shù)細(xì)胞分散，并且細(xì)胞間隙會(huì)有較多的死細(xì)胞和細(xì)胞碎片;
➋ NK-92細(xì)胞對(duì)IL-2敏感。培養(yǎng)基中IL-2降解，將導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差。IL-2在-20℃解凍后置于4℃冰箱保存，4℃保存不應(yīng)超過(guò)一周。配制好的新鮮培養(yǎng)基要盡快用完，建議每次使用前拿出來(lái)預(yù)熱，使用完畢后放回4℃冰箱保存；
➌ NK-92細(xì)胞對(duì)離心敏感。正常培養(yǎng)時(shí)，換液周期為2~3天，建議交替使用半量換液和離心換液法，即半量換液2~3次后，離心全量換液一次。盡量減少離心次數(shù)，細(xì)胞狀態(tài)不佳或細(xì)胞量少的時(shí)候，一般不建議離心；
➍ NK-92細(xì)胞對(duì)機(jī)械力較敏感。正常培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡量避免吹打力道過(guò)大。暴力吹打會(huì)使死細(xì)胞和細(xì)胞碎片增加。
➎ 正常培養(yǎng)時(shí)，NK-92細(xì)胞團(tuán)的間隙有部分死細(xì)胞和細(xì)胞碎片是正常的，如細(xì)胞碎片過(guò)多，可通過(guò)低速離心去除部分細(xì)胞碎片（800rpm,5min）。
➏ 血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。
➐ 細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)，聚集的細(xì)胞團(tuán)會(huì)逐漸增大，正常的細(xì)胞團(tuán)在顯微鏡下呈現(xiàn)白色透亮狀。若細(xì)胞聚集太多，出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)中部發(fā)暗時(shí)，可傳代；
➑ 細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液營(yíng)養(yǎng)要求很高，在正常培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)避免細(xì)胞團(tuán)塊太大，這會(huì)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)不足；細(xì)胞團(tuán)塊過(guò)大時(shí)，需要稍微吹散，注意控制吹打次數(shù)，不需刻意吹散成單個(gè)細(xì)胞。
➒ NK-92的傳代方法：將細(xì)胞團(tuán)用移液器輕輕吹散，均分到兩個(gè)瓶子里，每瓶再補(bǔ)充等量培養(yǎng)基。
➓ NK-92的凍存方法：細(xì)胞凍存的時(shí)候，細(xì)胞需要盡量分散，否則影響凍存效果。
NK-92MI培養(yǎng)要點(diǎn)
➊ NK-92MI細(xì)胞為懸浮生長(zhǎng)，大部分細(xì)胞聚集成團(tuán)，少數(shù)細(xì)胞分散，并且細(xì)胞間隙會(huì)有較多的死細(xì)胞和細(xì)胞碎片；
➋ NK-92MI細(xì)胞對(duì)離心敏感。正常培養(yǎng)時(shí)，換液周期為2~3天，建議交替使用半量換液和離心換液法，即半量換液2~3次后，離心全量換液一次。盡量減少離心次數(shù)，細(xì)胞狀態(tài)不佳或細(xì)胞量少的時(shí)候，一般不建議離心；
➌ NK-92MI細(xì)胞對(duì)機(jī)械力較敏感。正常培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)盡量避免吹打力道過(guò)大。暴力吹打會(huì)使死細(xì)胞和細(xì)胞碎片增加。
➍ 正常培養(yǎng)時(shí)，NK-92MI細(xì)胞團(tuán)的間隙有部分死細(xì)胞和細(xì)胞碎片是正常的，如細(xì)胞碎片過(guò)多，可通過(guò)低速離心去除部分細(xì)胞碎片（800rpm,5min）。
➎ 血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。
➏ 細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)，聚集的細(xì)胞團(tuán)會(huì)逐漸增大，正常的細(xì)胞團(tuán)在顯微鏡下呈現(xiàn)白色透亮狀。若細(xì)胞聚集太多，出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)中部發(fā)暗時(shí)，可傳代；
➐ 細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)液營(yíng)養(yǎng)要求很高，在正常培養(yǎng)過(guò)程中應(yīng)避免細(xì)胞團(tuán)塊太大，這會(huì)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)不足；細(xì)胞團(tuán)塊過(guò)大時(shí)，需要稍微吹散，注意控制吹打次數(shù)，不需刻意吹散成單個(gè)細(xì)胞。
➑ NK-92MI的傳代方法：將細(xì)胞團(tuán)用移液器輕輕吹散，均分到兩個(gè)瓶子里，每瓶再補(bǔ)充等量培養(yǎng)基。
➒ NK-92MI的凍存方法：細(xì)胞凍存的時(shí)候，細(xì)胞需要盡量分散，否則影響凍存效果。
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