富集和脫鹽是對生物分子進行分析需要進行的前處理之一。這些生物分析方法包括對純化時收集到的組分進行組織培養(yǎng)實驗,洗脫峰進行SDS-PAGE電泳。以及對樣品進行結構和純度分析時進行的質譜分析、毛細管電泳、傅里葉紅外光譜分析等等。
與脫鹽柱僅能實現(xiàn)脫鹽不同,
對檢測樣品進行超濾,用超純水進行緩沖液置換,可以快速實現(xiàn)脫鹽的同時也對樣品進行了濃縮,同時實現(xiàn)了脫去鹽分和提高濃度的目的。如果同時檢測的樣品很多,超濾的優(yōu)勢就更加明顯了,看看這么多小兄弟齊上陣,效率杠杠的!不得不說,超濾真的是一個一舉三得的好方案。
讓我們一起來認識一下超濾家族的小兄弟
Vivaspin 500和
Vivacon 500還有哪些超能力?
樣品量低?擔心回收率
Vivaspin 500
我采用的是超快流速的PES膜,有快速能力做保障,因此我只有單面膜,非特異性吸附降低一半。
Vivacon 500
我采用的是極低吸附的Hydrosart膜,而且是膜面積非常小的橫膜,最大程度降低非特異性吸附。
效率如何進一步提高?
Vivaspin 500
悄悄告訴你,由于我只有單面膜所以底部空間較大,離心后吸頭正好插入底部完全回收,不用反轉離心哦。
平行樣品間如何獲得
盡量一致的濃縮倍數(shù)?
Vivacon 500
我是平面膜盡量保持離心力一致即可;
Vivaspin 500
我是切向流單片膜,除了離心力外還要注意每一個小兄弟都保持刻度面朝上放置;如果使用的是市面上其它雙面膜的產(chǎn)品,盡量使兩個膜片側向相對,而不是上下相對。
如何避免超濾管上的
保護劑干擾檢測結果?
我們的超濾膜上有痕量的甘油和疊氮化鈉用來避免膜干燥。通常這些保護劑不會干擾檢測。但因為后續(xù)的檢測不同,如果有干擾可以用緩沖液和純凈水對超濾管進行預潤洗。如果仍對檢測有影響,還可以用0.1N的HCl進行預潤洗,去掉干擾峰。Vivaspin 500 有PCR grade的產(chǎn)品,進行核酸分離時如需要避免核酸的污染,可以采用。
1劍橋大學的科學家在進行胰島素A鏈肽段(MW 2.5kD)和降鈣素(MW 3,593 Da)研究時,采用Vivaspin 500 3kD的產(chǎn)品在13000rpm 離心對它們進行濃縮。盡管兩種蛋白的分子量很小,但回收率分別達到了98%和99%。
我們超濾小兄弟有多種孔徑:
Vivaspin 500
(3kD,5kD,10kD,30kD,50kD,100kD,300kD,1000kD)
Vivacon 500
(2kD,10kD,30kD,50kD,125kD)
無論處理病毒、蛋白、核酸樣品均可大顯身手。
百聞不如一試,
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-參考文獻-
1.Alan R. Johnson, Christine Turner
Anatomy Department, University of Cambridge, Downing Street, Cambridge, CB2 3DY. UK
Lab filtration Application note 2001