Taq酶選型三要素：擴(kuò)增效率、酶動(dòng)力、靈敏度

導(dǎo)讀

目前國內(nèi)市場(chǎng)上銷售的熱啟動(dòng)Taq酶的品牌很多，但真正高質(zhì)量的熱啟動(dòng)Taq酶并不多，面對(duì)這么多的熱啟動(dòng)Taq酶產(chǎn)品，我們應(yīng)如何選擇？

首先，選擇擴(kuò)增效率高的熱啟動(dòng)Taq酶

耐受性好的Taq酶反應(yīng)體系經(jīng)優(yōu)化后，擴(kuò)增效率在95%以上，即使是在目標(biāo)基因含量較低時(shí)也能夠獲得滿意的擴(kuò)增，在模板量較高時(shí)，也不易中毒，指數(shù)擴(kuò)增期較長。耐受性能較差的Taq酶，即使反應(yīng)體系經(jīng)多次優(yōu)化，擴(kuò)增效率仍達(dá)不到90%，擴(kuò)增曲線“S”型不明顯，斜率較小，曲線低平。模板量較低時(shí)擴(kuò)增不出來，較高時(shí)擴(kuò)增效果也不理想。所以PCR擴(kuò)增效率與Taq酶的性能密切相關(guān)，選擇高擴(kuò)增效率的DNA聚合酶對(duì)PCR、qPCR能否成功至關(guān)重要。
 

其次，選擇酶動(dòng)力強(qiáng)的熱啟動(dòng)Taq酶

Taq酶的酶動(dòng)力與擴(kuò)增效率有關(guān)。一般熱啟動(dòng)Taq酶的酶動(dòng)力越強(qiáng)，PCR擴(kuò)增的指數(shù)增長期越長，‘S型’曲線更加典型，熒光信號(hào)值更高，而且更適合做多重PCR檢測(cè)。酶動(dòng)力弱的品牌DNA聚合酶一般只能支持2重反應(yīng)，在做3重反應(yīng)時(shí)，擴(kuò)增曲線低矮，熒光信號(hào)值較低，無典型擴(kuò)增曲線，結(jié)果很難判定。

 

最后，選擇靈敏度高的熱啟動(dòng)Taq酶

一般說，DNA聚合酶的擴(kuò)增效率高，靈敏度就高，但也有不一致的情況。如果要擴(kuò)增的樣本目標(biāo)基因豐度較低，建議對(duì)Taq酶的擴(kuò)增靈敏度進(jìn)行檢測(cè)。

Taq酶的擴(kuò)增靈敏度進(jìn)行檢測(cè)，常見的檢測(cè)方法是將目標(biāo)基因質(zhì)粒片段進(jìn)行10倍或5倍梯度稀釋，在較低的幾個(gè)稀釋度進(jìn)行PCR檢測(cè)，選擇檢測(cè)靈敏度較高的熱啟動(dòng)Taq酶。

由此可見，研究者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)要求和經(jīng)費(fèi)情況進(jìn)行選擇，最好做一個(gè)梯度稀釋擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)，以檢測(cè)熱啟動(dòng)Taq酶的擴(kuò)增效率和靈敏度。

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