細(xì)菌內(nèi)毒素（脂多糖）的純化方法

脂多糖（Lipopoly saccharide，LPS）是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁中的一種成分，脂多糖對(duì)宿主是有毒性的。脂多糖只有當(dāng)細(xì)菌死亡溶解或用人工方法破壞菌細(xì)胞后才釋放出來(lái)，所以叫做內(nèi)毒素。

三氯醋酸法（Trichloroacetic Acid，TCA）、酚水法、苯酚╱氯仿╱石油醚法（PCP）、DMSO法、高壓超聲處理法所提取的LPS或多或少受到蛋白質(zhì)、核酸及多糖的污染，故需作一定的純化。LPS的純化方法目前最常用的為超速離心（4萬(wàn)轉(zhuǎn)×4小時(shí)，共三次），在這一條件下，LPS可沉淀下去，而蛋白質(zhì)、核酸及多糖則保留在上清液中，去除上清液即可得到較為純化的LPS。
 

但是這一方法需時(shí)較長(zhǎng)，且質(zhì)量過(guò)關(guān)的超速離心機(jī)目前在國(guó)內(nèi)亦不十分普及，故而難以推廣應(yīng)用。我們?cè)趯?shí)際工作中體會(huì)到，用任何方法提取的LPS，可再以PCP純化一次（140ml/g LPS），然后只需一次超離，即可取得高度純化的LPS。

提取的LPS除可被蛋白質(zhì)、核酸及多糖污染外，還可被一些小分子物質(zhì)，如多胺、陽(yáng)離子（Ca++、Mg++、K+等）的污染。通過(guò)電透析可將這類(lèi)小分子物質(zhì)除去。此時(shí)形成的LPS為酸性L(fǎng)PS（由LPS中類(lèi)脂A上的磷酸基團(tuán)形成的)。應(yīng)用堿中和LPS，可變成LPS的鹽。如用NaOH中和則可變成LPS鈉鹽，而應(yīng)用三乙基乙胺則可變成LPS三乙胺鹽、后者極易溶解于水，已廣泛地應(yīng)用于生物學(xué)研究。

綜上所述，LPS提取方法較多，應(yīng)當(dāng)根據(jù)菌種和實(shí)驗(yàn)條件而選用合適方法。PCP法對(duì)R型菌尤顯長(zhǎng)處，高壓超聲法雖可用于S或R菌，但方法步驟繁雜；DMSO法與TCA法已很少用到；而酚水法無(wú)論產(chǎn)量，純度及物理性質(zhì)均較滿(mǎn)意的，不失為一個(gè)實(shí)用的方法。LPS純化目前一般采用PCP法及一次超速離心，應(yīng)用該法可使LPS污染物包括蛋白質(zhì)、核酸及多糖除去，而應(yīng)用片透析方法，則可除去LPS中的小分子物質(zhì)如多胺、二價(jià)陽(yáng)離子，從而可得LPS轉(zhuǎn)化成實(shí)驗(yàn)需要的鹽類(lèi)。