多重PCR技術(shù)要點解析

多重PCR概述

多重PCR(multiplex PCR)，又稱多重引物PCR或復(fù)合PCR，它是在同一PCR反應(yīng)體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR反應(yīng)，其基本原理與常規(guī)PCR相同，區(qū)別在于多重PCR反應(yīng)體系加入一對以上引物，各對引物分別結(jié)合在模板相對應(yīng)部位，最終擴增出一條以上目的DNA片段。

多重PCR的特點

•高效性：在同一PCR反應(yīng)管內(nèi)同時檢出多種基因，或?qū)τ卸鄠�型別的目的基因進行分型，特別是微量樣本的多基因檢測。

•系統(tǒng)性：多重PCR適宜于成組病原體的檢測，如肝炎病毒，腸道致病性細菌，性病，無芽胞厭氧菌，戰(zhàn)傷感染細菌及細菌戰(zhàn)劑的同時偵檢。

•經(jīng)濟簡便性：多種病原體在同一反應(yīng)管內(nèi)同時檢出，將大大的節(jié)省時間，節(jié)省試劑，節(jié)約經(jīng)費開支。

多重PCR應(yīng)用

•基因診斷、腫瘤診斷、病原微生物的檢測。

•基因分型、連鎖分析。

•植物分子育種、基因表達檢測、病蟲害檢測。

•病原菌污染檢測。

•區(qū)域捕獲測序。

多重PCR之難

多重PCR并不是單純的將多對特異性引物混合成一個體系。多重PCR之所以難，在于多個靶點之間擴增條件不兼容，每個靶點都需要旁邊其他的引物配合。

就像是三人兩足游戲一樣，每個靶點成功擴增都是需要綁在一起的兩個人（一對引物）默契配合。而多重PCR就需要所有的選手同時起跑又同時到達，并且所有的選手都達到最優(yōu)發(fā)揮。

多重PCR優(yōu)化

為了達到更好的擴增效果，一般可以通過以下幾個方面進行優(yōu)化。

◆引物的優(yōu)化：

◆反應(yīng)體系：

◆反應(yīng)條件：

◆常見問題解決辦法：

多重PCR要求在同一反應(yīng)體系內(nèi)對多個位點進行特異性擴增。因而引物間的配對與競爭性擴增均會影響擴增效果。如果能選擇合適的反應(yīng)體系、反應(yīng)條件以及更合適的PCR儀，則有望提高多重PCR的擴增效果。所以在進行多重PCR的時候，不應(yīng)墨守成規(guī)，要根據(jù)自身實驗情況對實驗條件進行不斷優(yōu)化，達到最佳擴增效果。