PCR耗材選擇的問答詳解

導(dǎo)讀

俗話說的好，工欲善其事，必先利其器。耗材的選擇對得到滿意的PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。在分析PCR結(jié)果時(shí)，我們往往側(cè)重于對引物、酶的濃度、溫度和時(shí)間的分析，卻忽略了PCR耗材也是影響因素之一。PCR耗材類型眾多，如何選擇合適的PCR耗材呢？下面幾個(gè)問題可以幫你找到答案。
 

1、PCR耗材為什么一般都是PP材質(zhì)？

不管是普通的PCR還是實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR），通常其耗材會與試劑或樣品直接接觸，因而在生產(chǎn)制備過程中要求選用高質(zhì)量的材料和良好的加工工藝。一般耗材都是選擇聚丙烯（PP）材質(zhì)。聚丙烯（PP）材質(zhì)是生物學(xué)惰性材料，表面不易于粘附生物分子，且有著良好的化學(xué)耐性，及溫度耐受性。

2、不同體積的PCR管/板，該怎么選？

PCR 管/板常見的體積：

• 單管/8連管/12連管：0.5mL、0.2mL、0.1mL

• 96孔板：0.2mL、0.1mL

• 384孔板：0.02mL

PCR 管/板的規(guī)格：

依據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求選用合適的產(chǎn)品。PCR 管的體積大多數(shù)都可以滿足 PCR 反應(yīng)的要求。容量規(guī)格有標(biāo)準(zhǔn)容量和低容量可選，一般情況下推薦優(yōu)先選用低容管。因?yàn)榈腿莘磻?yīng)管/板有著較小的上方空間，可提高熱傳導(dǎo)率并降低蒸發(fā)。同時(shí)，在加樣時(shí)需要避免加樣過量或過少。過量會導(dǎo)致熱傳導(dǎo)率下降，溢出及交叉污染，而過少可能會造成樣品蒸發(fā)損失。

3、單管或8聯(lián)管的平蓋/凸蓋有什么區(qū)別?

當(dāng)樣品量較少時(shí)，都會優(yōu)先選用單管或者8聯(lián)管。但是當(dāng)反應(yīng)體積需求較大時(shí)，單管占優(yōu)勢，體積可達(dá) 0.5 mL。單管和8聯(lián)管有平蓋和凸蓋兩種，各有優(yōu)點(diǎn)。平蓋可為qPCR提供精確的熒光信號傳遞；便于書寫標(biāo)記。凸蓋與PCR儀蓋接觸，減少壓力引起的管變形等；但會影響熒光信號傳遞，無法應(yīng)用于qPCR實(shí)驗(yàn)。

4、不同的96孔板使用場景有什么不同？

96孔板一般分為無裙邊板、半裙邊板和全裙邊板。

無裙邊板：可適用于大多數(shù)的 PCR 儀或 qPCR 儀，但不適用于自動化應(yīng)用。移液過程中穩(wěn)定性不高，需要配合板托使用。

半裙邊板：可適配標(biāo)簽或應(yīng)用條碼，及自動化應(yīng)用，且有著較好的移液穩(wěn)定性。

全裙邊板：非常適用于自動化實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，也可適配標(biāo)簽及應(yīng)用條碼。機(jī)械強(qiáng)度較好，可適用于凸出模塊的 PCR 儀，且移液過程中穩(wěn)定性高。

5、PCR板/管材質(zhì)是厚點(diǎn)的穩(wěn)定性更好嗎？

不是的。PCR耗材的管壁厚度要均一，才能提供一致的熱傳導(dǎo)。超薄管壁較標(biāo)準(zhǔn)版薄50%，可進(jìn)一步減少熱屏障，帶來更快更好的反應(yīng)效果。

6、對于 96 孔或者 384 孔板，為什么切角和標(biāo)識都不是很相同呢？

切角：PCR 板的切角位置選擇取決于適配儀器要求，便于定位。

標(biāo)識：PCR 板的數(shù)字字母標(biāo)記有助于識別單個(gè)孔及樣品位置。一般為凸出的顏色數(shù)字標(biāo)識或者印刻標(biāo)識。對于一些自動化應(yīng)用實(shí)驗(yàn)，印刻標(biāo)記的反應(yīng)板密封性會更好。

7、有的PCR 板孔是凸出的，有的卻是平的呢，哪個(gè)更好？

適合的才是最好的。常見的 PCR 板有平孔緣和加高孔緣兩種。平孔緣的反應(yīng)板，可適用于大多數(shù)的 PCR 儀。升孔緣的反應(yīng)板，便于封膜，可降低樣品間的交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。

8、不同顏色的PCR管/板，該怎么選？

對于普通的PCR反應(yīng)選用透明的就可以。在實(shí)時(shí)PCR反應(yīng)時(shí)，白管的靈敏度和一致性相對更高。白色管壁能夠阻止熒光穿過管壁和折射，進(jìn)而防止熒光傳至加熱模塊，被模塊吸收或發(fā)生不一致反射等情況。相比于透明管，在白管的頂端能夠采集到更強(qiáng)，更聚焦的熒光信號。