人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞SH-SY5Y培養(yǎng)常見問題及解決辦法

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞（SH-SY5Y） 是于1970年建自骨瘤轉(zhuǎn)移灶的神經(jīng)母細(xì)胞瘤 SK-N-SH細(xì)胞系經(jīng)3次克隆后的亞系(SK-N-SH→SH-SY→SH-SY5→SH-SY5Y)。該細(xì)胞的密度可高達(dá)106 cells/cm2，具有中等水平的多巴胺β羥化酶的活性。基本形態(tài)上皮樣，多數(shù)貼壁，少數(shù)懸浮； 營養(yǎng)體系：推薦DMEM：F12(abs9561)+10%FBS(abs972)+1%P/S。
 

表1 SH-SY5Y細(xì)胞基本信息

圖1 SH-SY5Y（人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞）
 

首先，我們討論的是SY5Y五天傳一代算不算正常？SH-SY5Y 增殖緩慢，再加上喜歡聚團(tuán)生長，鏡下觀察融合率不高，但細(xì)胞簇實際密度大，需要5-7天才能達(dá)到80%以上的融合率，所以5-7天傳一代很正常（如圖2所示，融合率約為70%的SY5Y）。如果細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)到一周都無法傳代，建議把細(xì)胞消化下來，接種到更小的孔板中，增加細(xì)胞密度，促進(jìn)細(xì)胞生長。
 

接下來我們討論第二個話題SY5Y懸浮細(xì)胞過多正不正常？SY5Y的生長特點為大部分貼壁，呈上皮樣，有短觸角延伸出來，傾向于成簇生長，容易成團(tuán)；少部分懸浮，圓潤有光澤。 如果SY5Y出現(xiàn)大量懸浮是不正常現(xiàn)象。如圖3所示，懸浮細(xì)胞居多的SY5Y。
 

圖2 懸浮細(xì)胞居多的SY5Y

如何解決這種情況呢？如果貼壁細(xì)胞生長狀態(tài)良好、密度適中，可以舍棄懸浮細(xì)胞；如果貼壁細(xì)胞很少，用胰酶消化并離心，將細(xì)胞用新鮮的完培重懸并接種到培養(yǎng)瓶，隔段時間觀察細(xì)胞是否貼壁。
 

最后我們討論一下不同營養(yǎng)體系培養(yǎng)的SY5Y形態(tài)差異大不大。我們對比了兩種營養(yǎng)體系培養(yǎng)的SY5Y細(xì)胞形態(tài)。體系一是DMEM+20%FBS-熱滅活，體系2是DMEM-F12 + 10%FBS（如圖4所示）。在培養(yǎng)的第2天和第5天進(jìn)行了相應(yīng)的形態(tài)比較。傳代第2天，低密度下，兩種營養(yǎng)體系培養(yǎng)的SY5Y形態(tài)沒有明顯區(qū)別，均為少數(shù)懸浮，多數(shù)呈上皮樣，有短觸角延伸出來，傾向于聚團(tuán)生長；傳代第5天，體系2培養(yǎng)的SY5Y團(tuán)塊話過于嚴(yán)重，細(xì)胞黏在一起，細(xì)胞輪廓難以分辨清楚，體系1細(xì)胞有略微聚團(tuán)（SY5Y本身有聚團(tuán)生長特性），細(xì)胞形態(tài)正常。體系1更適合細(xì)胞增殖。
 

圖3 兩種營養(yǎng)體系培養(yǎng)的SY5Y形態(tài)對比圖（兩種營養(yǎng)體系所用血清批號一致）