CD14分子與脂多糖的結(jié)合域介紹及作為脂多糖受體的功能簡介

Stelter等在N端的152氨基酸區(qū)域內(nèi)用丙氨酸取代而獲得一系列的CD14突變體，23種突變體蛋白質(zhì)中有21種能穩(wěn)定地表達在轉(zhuǎn)染的CHO細胞表面，其中20種在血漿中對LBP以依賴性的方式結(jié)合脂多糖，只有一種突變體（Ala39-Ala41，Ala43，Ala44）CD14不能與脂多糖或大腸桿菌發(fā)生特異性的相互作用，也不能引發(fā)由脂多糖啟動的NF-eB的核移位，且這種突變體的CD14不與CD14單克隆抗體My4發(fā)生反應(yīng)�？笴D14單克隆抗體My4具有廣泛的種屬間交叉反應(yīng)性，與人、牛、豬、兔及豚鼠的單核細胞的CD14均能反應(yīng)，說明My4只能夠識別CD14中非常保守的表位。

上述結(jié)果顯示，N端39~44殘基是人類CD14與脂多糖結(jié)合位點的最基本部分。Shapiro等在CD14分子的N端合成有5個氨基酸相互重疊，長度為15個氨基酸的多肽，其中包括含上述區(qū)域氨基酸的15肽能夠抑制脂多糖與sCD14的結(jié)合。

CD14作為脂多糖受體的功能
CD14分子作為脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）受體的依據(jù)有：①脂多糖能與mCD14和sCD14分子相結(jié)合。②CD14單克隆抗體能夠抑制脂多糖刺激吞噬細胞的反應(yīng)能力。③對脂多糖低反應(yīng)或不反應(yīng)的細胞轉(zhuǎn)染CD14 cDNA后對內(nèi)毒素反應(yīng)的敏感性顯著增加。④CD14分子表達缺陷的小鼠對內(nèi)毒素的反應(yīng)顯著下降。所以，CD14被認(rèn)為是內(nèi)毒素重要的受體。⑤用不同顏料顯示劑分別標(biāo)記脂多糖和CD14發(fā)現(xiàn)，在發(fā)生信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的過程中，有顏色重疊現(xiàn)象。

研究者已闡明了CD14與內(nèi)毒素結(jié)合在體內(nèi)的作用，他們發(fā)現(xiàn)使用CD14抗體能夠阻止CD14與脂多糖的結(jié)合并能顯著減弱內(nèi)毒素的激活效應(yīng)。CD14能夠有效結(jié)合脂多糖，有LBP存在時，其結(jié)合效應(yīng)能增大到100~1000倍。LBP為相對分子質(zhì)量60000的糖蛋白，主要由肝臟和肺合成，與BPI和其他脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)的氨基酸序列具有顯著相似性。一般情況下LBP在血漿中的濃度為2~20g/L，在急性期反應(yīng)時可升到100~200g/L。LBP能與脂多糖聚集體相結(jié)合，一個LBP分子能夠運輸幾百個脂多糖單體，并具有催化特性。
 

1990年，Wright 等首先認(rèn)識了CD14在識別脂多糖中的作用。他們發(fā)現(xiàn)，以外周血中小劑量內(nèi)毒素刺激時，巨噬細胞分泌TNF-α的效應(yīng)對CD14具有依賴性，CD14單克隆抗體具有抑制TNF-α產(chǎn)生的能力。隨后，其他學(xué)者證實CD14在巨噬細胞產(chǎn)生TNF-α中具有重要作用。脂多糖誘導(dǎo)IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α等表達的效應(yīng)可用CD14單克隆抗體進行部分抑制，這進一步證明CD14在脂多糖介導(dǎo)的細胞激活中的作用。