常用細(xì)胞染色的方法、特點(diǎn)及熒光染料選擇指南

細(xì)胞培養(yǎng)后，需要對(duì)其生長(zhǎng)情況、形態(tài)甚至生物學(xué)性狀進(jìn)行觀察。由于細(xì)胞小而復(fù)雜，若不借助適當(dāng)?shù)氖侄�，難以觀察其形態(tài)、結(jié)構(gòu)，更難發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)各種組分的分子組成及功能。目前，已有多種研究細(xì)胞的技術(shù)，從光學(xué)顯微鏡到電子顯微鏡，從一般細(xì)胞化學(xué)法到免疫化學(xué)法。細(xì)胞染色是研究細(xì)胞生物學(xué)特征的一種常用手段，然而，對(duì)于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)新手來(lái)說，想要獲得一張漂亮的細(xì)胞染色圖并不容易。染色試劑不會(huì)選、細(xì)胞染色不均勻、染色時(shí)切片脫落等都是很常見的問題。今天小愛就為大家整理了幾種常用細(xì)胞染色方法及染色劑選擇指南，快來(lái)學(xué)習(xí)！
 

表1 幾種常用細(xì)胞染色方法及特點(diǎn)

了解細(xì)胞染色方法后，下面小愛向大家介紹研究不同細(xì)胞結(jié)構(gòu)用到的熒光染料。

一、細(xì)胞膜常用染料

DiD、DiR、DiO和DiI染料是最常見的細(xì)胞膜染料（見表2），它們是一族親脂性的熒光染料，用于細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和結(jié)構(gòu)研究。該系列染料進(jìn)入細(xì)胞膜后，會(huì)在整個(gè)細(xì)胞膜上側(cè)向擴(kuò)散，在最佳濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。其中DiD染料的染色效率高，染色均一，熒光不易猝滅，無(wú)明顯細(xì)胞毒性，且受自身熒光背景干擾小。目前DiD已成功應(yīng)用于多種細(xì)胞的體內(nèi)示蹤研究，如Treg細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、造血干祖細(xì)胞等

二、其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)常用染料

生物染料在細(xì)胞結(jié)構(gòu)和組分鑒定中有著廣泛的應(yīng)用，除細(xì)胞膜研究外，我們經(jīng)常也會(huì)對(duì)一些其它細(xì)胞結(jié)構(gòu)及成分進(jìn)行探索，例如線粒體、溶酶體、蛋白質(zhì)、細(xì)胞核等，而對(duì)于不同的細(xì)胞結(jié)構(gòu)有不同的染料進(jìn)行染色。

三、細(xì)胞染色神器DAPI + Phalloidin

DAPI染色液（DAPI Staining Solution）常用于細(xì)胞核染色，可將細(xì)胞核染成藍(lán)色。鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是細(xì)胞骨架的染色神器，羅丹明標(biāo)記的Phalloidin（TRITC- Phalloidin）可將細(xì)胞染成橙紅色，DAPI與Phalloidin染色液是研究細(xì)胞形態(tài)變化時(shí)經(jīng)常用到的兩種共染的試劑，染色效果可見圖1[1]：A1-E1用TRITC-鬼筆環(huán)肽（橙紅）染色的細(xì)胞骨架免疫熒光圖；A2-E2用DAPI（藍(lán)色）染色的細(xì)胞核免疫熒光圖；A3-E3合并的L929細(xì)胞免疫熒光染色圖。圖2[2]是S100A16過表達(dá)或下調(diào)前后PDAC細(xì)胞形態(tài)的變化。
 

注意事項(xiàng)：
※  熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡快檢測(cè)；
※  避免反復(fù)凍融，否則容易失效；
※  DAPI對(duì)人體有刺激性，注意適當(dāng)防護(hù)；
※  鬼筆環(huán)肽具有毒性，需小心操作（對(duì)人的半數(shù)致死劑量 LD50約 2mg/kg）。

參考文獻(xiàn)

[1] Li J, Chen JN, Peng ZX, et al. Multifunctional Electrospinning Polyhydroxyalkanoate Fibrous Scaffolds with Antibacterial and Angiogenesis Effects for Accelerating Wound Healing[J]. Applied Materials & Interfaces. 2022.

[2] Li T, Ren TY, Huang CM, et al. YS100A16 induces epithelial-mesenchymal transition in human PDAC cells and is a new therapeutic target for pancreatic cancer treatment that synergizes with gemcitabine[J]. Biochemical Pharmacology 189 (2021) 114396.