細(xì)胞培養(yǎng)基pH值對(duì)細(xì)胞的影響

  培養(yǎng)基是用來(lái)供給細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)，促使細(xì)胞增殖的，也是細(xì)胞賴以生長(zhǎng)的環(huán)境。細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中用量最多的就是細(xì)胞培養(yǎng)基，雖然細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)基本技術(shù)大同小異，但是每種細(xì)胞的培養(yǎng)條件卻相差甚遠(yuǎn)。若偏離某種細(xì)胞所需的培養(yǎng)條件，則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞表達(dá)不同的表型。
一、培養(yǎng)基體系主要成分及功能介紹 

1、 葡萄糖：用于細(xì)胞能量代謝。

2、CO₂：細(xì)胞需要少量的二氧化碳來(lái)維持生長(zhǎng)。

3、酚紅：用于監(jiān)測(cè)培養(yǎng)基的pH值。

在細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中，由于細(xì)胞釋放的代謝物改變了pH值，培養(yǎng)基的顏色也隨之改變。在較低的pH值下，酚紅會(huì)變成中黃色，而在較高的pH值下，它會(huì)變成中紫色。對(duì)于大多數(shù)培養(yǎng)體系(pH為7.2 ~ 7.4)，培養(yǎng)基應(yīng)為鮮紅色。（部分特殊培養(yǎng)基不添加酚紅，例如對(duì)雌激素敏感的乳腺組織細(xì)胞，酚紅會(huì)發(fā)揮跟類固醇相似的功能從而影響細(xì)胞。

細(xì)胞培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)基的pH有一定的要求， pH 值必須隨著時(shí)間的推移保持平衡和穩(wěn)定。一般在7.2-~7.4之間為宜，偏酸或偏堿的培養(yǎng)基可能都會(huì)使細(xì)胞狀態(tài)不佳。

培養(yǎng)基pH值對(duì)應(yīng)顏色

（1）細(xì)胞過(guò)量生長(zhǎng)

（2）細(xì)菌污染

（3）培養(yǎng)箱中CO₂濃度過(guò)高

紫色的培養(yǎng)基為堿性，說(shuō)明：

4、L-谷氨酰胺：

幾乎是所有哺乳動(dòng)物和昆蟲細(xì)胞所必需的氨基酸，用于合成蛋白質(zhì)，參與核酸代謝。它相比其他氨基酸更不穩(wěn)定，容易降解，降解的速率和程度與儲(chǔ)存溫度、時(shí)間和pH值有關(guān)。

5、非必需氨基酸NEAA：

所有的培養(yǎng)基配方都含有10種必需氨基酸以及半胱氨酸、谷氨酰胺和酪氨酸。在一些培養(yǎng)基中還需要加入其他非必需氨基酸(丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、甘氨酸、谷氨酸、脯氨酸和絲氨酸)可以減少細(xì)胞的代謝負(fù)擔(dān)，從而增加細(xì)胞增殖。

6、 丙酮酸鈉：

二、常見的培養(yǎng)基添加因子

6、白細(xì)胞介素2（IL-2）：IL-2作為T細(xì)胞生長(zhǎng)因子，可增強(qiáng)NK細(xì)胞的細(xì)胞溶解活性，并促進(jìn)B細(xì)胞產(chǎn)生免疫球蛋白。常用于NK92細(xì)胞的培養(yǎng)。

1、培養(yǎng)基使用效果不佳：應(yīng)定期確認(rèn)培養(yǎng)基有效期，并確認(rèn)是否使用細(xì)胞相應(yīng)的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基使用不當(dāng)會(huì)影響細(xì)胞狀態(tài)。例如，293T需用高糖DMEM培養(yǎng)，而THP-1則需要用RPMI 1640培養(yǎng)！

2、培養(yǎng)基使用時(shí)應(yīng)儲(chǔ)存于4ºC并分裝，避免反復(fù)升溫加速谷氨酰胺的降解。

3、不同培養(yǎng)基由于成分不同，顏色也不盡相同，例如DMEM呈鮮紅色，而MEM呈粉紅色。

4、細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，可根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)基顏色變化，對(duì)培養(yǎng)狀態(tài)進(jìn)行分析，當(dāng)培養(yǎng)基顯著變橙色甚至黃色時(shí)，說(shuō)明細(xì)胞代謝產(chǎn)生了大量酸性物質(zhì)，需及時(shí)更換新鮮的完全培養(yǎng)基。