Caco-2細(xì)胞培養(yǎng)攻略

Caco-2細(xì)胞分離自一名72歲男性的直腸原位癌細(xì)胞，當(dāng)長到滿時表現(xiàn)出特征性的腸上皮細(xì)胞分化。因此，Caco-2細(xì)胞模型是十幾年來國外廣泛采用的一種研究藥物小腸吸收的體外模型，具有相對簡單、重復(fù)性較好、應(yīng)用范圍較廣的特點。

表1 Caco-2細(xì)胞基本信息
 

圖1 Caco-2（人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞）
 

首先，我們要討論的第一個問題是如何判斷細(xì)胞狀態(tài)好不好？為了更直觀地了解細(xì)胞狀態(tài)，我們可以看一下如下圖2和圖3。正常的Caco-2細(xì)胞呈島狀生長，細(xì)胞間連接緊密，細(xì)胞群的邊界光滑，細(xì)胞群中常常含有巨大的空泡（屬于正�，F(xiàn)象）。

圖2 Caco-2正常形態(tài)

圖3 Caco-2正常形態(tài)
 

接下來，我們討論第二個問題是該細(xì)胞消化難問題。該類細(xì)胞間連接緊密，細(xì)胞難以消化解離，并且培養(yǎng)時間越久，細(xì)胞間連接越緊密越難消化。所以，消化時要注意以下幾點：
 

最后，我們要討論的是細(xì)胞貼壁和增殖緩慢問題。尤其剛復(fù)蘇時細(xì)胞貼壁特別慢，一般2到3天貼壁展開（還可能會有空泡）；有少量發(fā)亮的細(xì)胞漂浮或黏附在細(xì)胞克隆上是正常的，隨后會進(jìn)入克隆并正常生長；為避免在細(xì)胞附著初期干擾細(xì)胞，建議到第三天再換液。

同時該細(xì)胞增殖緩慢，倍增時間約為72小時，按1:3傳代的情況下，約一周傳代一次。由于該細(xì)胞對營養(yǎng)需求高，建議使用20%的優(yōu)級胎牛血清。如果細(xì)胞隨著培養(yǎng)過程，漂浮得越來越嚴(yán)重，甚至大塊兒飄起，就要檢查培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)環(huán)境是否出現(xiàn)異常。

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