希爾博士教程系列：如何做好文獻(xiàn)中的NTA粒徑濃度圖詳解

前言
Dr.Cell實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)外泌體NTA，提供NTA鑒定報(bào)告時(shí)，經(jīng)常會(huì)被問(wèn)到：你們可以提供文獻(xiàn)中的粒徑濃度分布圖么？文獻(xiàn)中的粒徑濃度分布圖怎么做的？……
今天就和小希一起來(lái)Get新技能，學(xué)習(xí)怎么用Origin軟件繪制出文獻(xiàn)中NTA粒徑濃度分布圖！

獲得數(shù)據(jù)
Dr.Cell實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)外泌體NTA會(huì)提供完整的數(shù)據(jù)，每個(gè)樣本每檢測(cè)一次，將得到以下5個(gè)文件（每個(gè)送檢外泌體樣本Dr.Cell實(shí)驗(yàn)室將至少重復(fù)檢測(cè)3次，因此一個(gè)檢測(cè)樣本會(huì)有3組NTA如下數(shù)據(jù)）。 ① 視頻文檔：記錄顆粒的布朗運(yùn)動(dòng)狀態(tài)
② 檢測(cè)報(bào)告：PDF文檔（詳情請(qǐng)查閱：NTA報(bào)告解讀說(shuō)明）
③ 原始數(shù)據(jù)：記錄檢測(cè)過(guò)程中儀器的溫度、電導(dǎo)率等參數(shù)，以及顆粒粒徑與數(shù)量原始數(shù)據(jù)
④ 檢測(cè)說(shuō)明：記錄檢測(cè)樣本池11個(gè)位點(diǎn)的檢測(cè)情況
⑤ 原始文件：FCS文件，可通過(guò)ZetaView軟件、流式Flowjo軟件打開(kāi)

制圖
我們將用文檔③中原始數(shù)據(jù)進(jìn)行作圖。
*注意.
文檔③中原始數(shù)據(jù)包含線(xiàn)性檢測(cè)數(shù)據(jù)與對(duì)數(shù)檢測(cè)數(shù)據(jù)！
兩組數(shù)據(jù)之間是 “-1.000000、-1.000000、-1.000000、 -1.000000”隔開(kāi)！
常規(guī)取線(xiàn)性數(shù)據(jù)作圖，即選擇
“Size Distribution”至 “-1.000000、-1.000000、-1.000000、 -1.000000” 之間的數(shù)據(jù)！
也可直接宣傳粒徑至1000nm的數(shù)據(jù)作圖。
    直接將數(shù)據(jù)復(fù)制至Origin軟件工作表中
（例：選取至粒徑1000nm的顆粒數(shù)據(jù)）
Origin 軟件打開(kāi)如下圖： ▲ Origin
將“Size / nm Number Particles / mL E+6 Volume / nm^3” 復(fù)制至Origin 軟件“Long Name”行， C列中“E+6”無(wú)意義，直接去掉。
將粒徑濃度數(shù)據(jù)（例：選取粒徑2.5nm至粒徑1002nm的顆粒數(shù)據(jù)）復(fù)制至A1單元格開(kāi)始。
  選中A列（粒徑）與C列（顆粒濃度），點(diǎn)擊工具欄中“Plot→Line→Line”，得到粒徑濃度圖。

調(diào)整坐標(biāo)
調(diào)整縱坐標(biāo)，雙擊縱坐標(biāo)，彈出“Y Axis”框，“Display”選擇“Scientific：1E3”
點(diǎn)擊“Scale”,“From”選項(xiàng)可以調(diào)從“0”開(kāi)始，也可以不調(diào)整，此例調(diào)整為“0”。
“To” 選項(xiàng)調(diào)整Y軸最大值，使得峰值位于圖中的上1/3處。
“Increment”調(diào)整縱坐標(biāo)單位刻度，單位刻度為“100000”。 調(diào)整后如下圖： 依次調(diào)整橫坐標(biāo)，雙擊橫坐標(biāo)刻度數(shù)值后，點(diǎn)擊“Scale”,“From”選項(xiàng)可以調(diào)從“0”開(kāi)始，也可以不調(diào)整。

“To”選項(xiàng)可以調(diào)成“600-1000”，“Increment”調(diào)整縱坐標(biāo)單位刻度，此例中調(diào)整為“100”。 調(diào)整后如下圖：

平滑處理
接下來(lái)，平滑處理，點(diǎn)擊“Analysis”→“Signal Processing” →“Smooth” →“Open Dialog” 即彈出對(duì)話(huà)框。
下一次平滑處理時(shí)可直接點(diǎn)擊“Analysis”→“1 Smooth” 即彈出對(duì)話(huà)框。   彈出框“Output”選項(xiàng)選擇“XY = input XY”, 即在原圖上直接調(diào)整。調(diào)整后如下圖：
其中“Points of Window”是調(diào)整平滑度的，一般可以不用調(diào)整，數(shù)字越大越失真。 雙擊峰圖跳出“Plot Details”可調(diào)整峰圖顏色、線(xiàn)條、寬度等。 完成，調(diào)整后如下圖。

原液粒徑濃度分布圖
如需要得到原液的粒徑濃度分布圖，將“Particle/mL ”數(shù)據(jù)乘以稀釋倍數(shù)，即得到原液濃度結(jié)果。
稀釋倍數(shù)見(jiàn)文檔中“Dilution”，或者PDF報(bào)告右上角“Dilution Factor:” ▲ PDF報(bào)告-稀釋倍數(shù)
同樣可以對(duì)比分析多個(gè)樣本的粒徑濃度分布結(jié)果，得到組合圖。
完整的操作視頻： 此次采用的是Origin軟件：OriginLab OriginPro 8.5。
軟件下載地址：關(guān)注逍鵬生物，回復(fù)：Origin
版權(quán)屬軟件注冊(cè)者所有，僅限科研試用！

Reference
Navarro Sanchez, M.E., Soulet, D., Bonnet, E.et al. Rabies Vaccine Characterization by Nanoparticle Tracking Analysis. Sci Rep 10, 8149 (2020). https://doi.org/10.1038/s41598-020-64572-6