配制培養(yǎng)基母液的實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c原理及操作步驟
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
1、了解無菌操作
2、掌握培養(yǎng)基母液的配制方法
二、實(shí)驗(yàn)原理
配制培養(yǎng)及時(shí)，為了使用方便和用量準(zhǔn)確，通常采用母液法進(jìn)行配制，即將所選培養(yǎng)基配方中各試劑的用量，擴(kuò)大若干倍后再準(zhǔn)確稱量，分別先配制成一系列的母液置于冰箱中保存，使用時(shí)按比例吸取母液進(jìn)行稀釋配制即可。
三、實(shí)驗(yàn)器材和藥品
1、器材：電子天平、燒杯、容量瓶、細(xì)口瓶、藥勺、玻璃棒、電爐。
2、藥品：NH4NO3、KNO3、CaCl2·2H2O、 MgSO4·7H2O、KH2PO4、KI、H3BO3、MnSO4·4H2O、 ZnSO4·7H2O、Na2MoO4·2H2O、 CuSO4·5H2O、CoCl2·6H2O、FeSO4·7H2O、 Na2-EDTA·2H2O、肌醇、煙酸、鹽酸吡哆醇(維生素B6)、鹽酸硫胺素 (維生素B1)、甘氨酸。
四、實(shí)驗(yàn)步驟
1、大量元素母液的配制
各成分按照表1培養(yǎng)基濃度含量擴(kuò)大10倍用天平稱取，用蒸餾水分別溶解，按順序逐步混合。后用蒸餾水定容到 1000ml的容量瓶中，即為10倍的大量元素母液。到入細(xì)口瓶，貼好標(biāo)簽保存于冰箱中。配制培養(yǎng)基時(shí)，每配1L培養(yǎng)基取此液100ml。
表1 MS培養(yǎng)基大量元素母液制備
注意：
(1) 配制大量元素母液時(shí)，某些無機(jī)成分如Ca2+、SO42－、Mg 2+和H2PO4一等在一起可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生沉淀物。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，母液配制時(shí)要用純度高的重蒸餾水溶解，藥品采用等級(jí)較高的分析純，各種化學(xué)藥品必須先以少量重蒸餾水使其充分溶解后才能混合，混合時(shí)應(yīng)注意先后順序。特別應(yīng)將Ca2+、SO42一、Mg 2十和H2PO4一等離子錯(cuò)開混合，速度宜慢，邊攪拌邊混合。
(2)CaCl2·2H2O要在最后單獨(dú)加入，在溶解CaCl2·2H2O 時(shí)，蒸餾水需加熱沸騰，除去水中的CO2，以防沉淀。另外，CaCl2·2H2O放入沸水中易沸騰，操作時(shí)要防止其溢出。
2、微量元素母液的配制
MS培養(yǎng)基的微量元素?zé)o機(jī)鹽由7種化合物（除Fe ）組成。微量元素用量較少，特別是 CuSO4·5H2O、 CoCl2·6H2O ，因此在配制中分微量Ⅰ、Ⅱ配制。按照表2，表3配方，用電光天平稱量，其它同大量元素。配制培養(yǎng)基時(shí)，每配制1L培養(yǎng)基，取微量Ⅰ10ml，微量Ⅱ0.1ml。
表2 MS培養(yǎng)基微量Ⅰ的配制
表3 MS培養(yǎng)基微量Ⅱ的配制
注意：
使用電子分析天平時(shí)注意不要把藥品撒到稱盤上，用完以后，用吸耳球?qū)⑻炱絻?nèi)的臟物清理干凈。
3、鐵鹽母液的配制
鐵鹽不是都需要單獨(dú)配成母液，如檸檬酸鐵，只需和大量元素一起配成母液即可。目前常用的鐵鹽是硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉的螯合物，必須單獨(dú)配成母液。這種螯合物使用起來方便，又比較穩(wěn)定，不易發(fā)生沉淀。配制方法同上，直接用蒸餾水加熱攪拌溶解，定容至1L。配制培養(yǎng)基時(shí)，配制1L取此液10ml。
表4 MS鐵鹽母液的配制
注意：
在配制鐵鹽時(shí)，如果加熱攪拌時(shí)間過短，會(huì)造成FeS04和Na2-EDTA 鰲合不徹底，此時(shí)若將其冷藏，F(xiàn)eSO4會(huì)結(jié)晶析出。為避免此現(xiàn)象發(fā)生，配制鐵鹽母液時(shí)，F(xiàn)eSO4和Na2-EDTA 應(yīng)分別加熱溶解后混合，并置于加熱攪拌器上不斷攪拌至溶液呈金黃色(約加熱20 - 30 min)，調(diào)pH值至5 .5，室溫放置冷卻后，再冷藏。
4、有機(jī)母液的配制
MS培養(yǎng)基的有機(jī)成分有甘氨酸、肌醇、煙酸、鹽酸硫胺素和鹽酸吡哆素。培養(yǎng)基中的有機(jī)成分原則上應(yīng)分別單獨(dú)配制。配制直接用蒸餾水溶解，定容至1L，注意稱量時(shí)用電子分析天平。配制培養(yǎng)基時(shí)，每配1L培養(yǎng)基取此液5ml。
注意：
由于維生素母液營(yíng)養(yǎng)豐富，因此貯藏時(shí)極易染菌。被菌類污染的維生素母液，有效濃度降低，并且易給后期培養(yǎng)造成傷害，不宜再用。避免此現(xiàn)象發(fā)生的方法是:配制母液時(shí)用無菌重蒸餾水溶解維生素，并貯存在棕色無菌瓶中，或縮短貯藏時(shí)間。
表5 MS培養(yǎng)基有機(jī)物質(zhì)母液的制備
5、激素母液配制
植物組織培養(yǎng)中使用的激素種類及含量需要根據(jù)不同的研究目的而定。一般激素母液的配制的終濃度以0.5mg/ml為好，需要注意的是：
(1)配制生長(zhǎng)素類，例如IAA、NAA、2.4-D、6BA，應(yīng)先用少量95%乙醇或無水乙醇充分溶解，或者用 1mol/L的NaOH溶解，然后用蒸餾水定容到一定的濃度。
(2)細(xì)胞分裂素，例如KT，應(yīng)先用少量95%乙醇或無水乙醇加3~4滴1mol/L的鹽酸溶解，再用蒸餾水定容。
(3)配制生物素，用稀氨水溶解，然后定容。
注意：
所有的母液都應(yīng)保存在0~4℃冰箱中，若母液出現(xiàn)沉淀或霉團(tuán)則不能繼續(xù)使用。
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