超微量測定蛋白核酸含量的應(yīng)用方案

實驗原理
測蛋白質(zhì)含量的原理
由于蛋白質(zhì)分子中酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵，因此蛋白質(zhì)有吸收紫外線的性質(zhì)，吸收高峰在280nm波長處。在此波長范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)溶液的光吸收值( A280)與其含量成正比關(guān)系，可用作定量測定。

測核酸含量的原理
核酸及其衍生物，核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性質(zhì)，其吸收高峰在260nm波長處。DNA濃度( ug/ml) =A260/0.024/L*稀釋倍數(shù)(L為比色池厚度1cm)

儀器及試劑
UL-1000超微量紫外可見分光光度計
標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。結(jié)晶牛血清蛋白，預(yù)先經(jīng)微量凱氏定氮法測定蛋白氮含量，根據(jù)其純度配制成1mg/ml蛋白溶液。
待測蛋白溶液
核酸溶液

操作步驟
繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
按下表分別向每支試管加入各種試劑，搖勻。選用光程為1cm的石英比色杯，在280nm波長處分別測定各管溶液的0A280值。以A280值為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
 
樣品測定
取待測蛋白質(zhì)溶液1ml,加入蒸餾水3ml，搖勻，按上述方法在280nm波長處測定光吸收值，并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測蛋白質(zhì)的濃度。
取待測核酸溶液1ml，加入蒸餾水3ml，測定核酸的濃度。

實驗結(jié)果
測得的八個試管中溶液的A值如圖所示
蛋白質(zhì)樣品的A值為0.063
核酸樣品的A值為0.039

蛋白質(zhì)含量
根據(jù)方程當(dāng)A=0. 063時，0. 0630=0. 6123c+0. 0070.
C=0.0945mg/ml .
因為溶液稀釋了4倍，所以樣品蛋白的濃度為
0.0945*4=0. 378mg/ml

核酸含量
DNA濃度= A260/0.024/L*稀釋倍數(shù)
=0.039/0.024/1*4
=7.8 ug/ml