肺癌PD-1免疫檢查實驗方法與結果分析
實驗簡介
PD-1，全稱為“程序性死亡受體1”，又稱為CD279，是一種重要的免疫抑制分子。PD-1主要功能是下調免疫系統對人體細胞的反應、抑制T細胞炎癥活動，調節(jié)免疫系統并促進自身耐受。PD-1發(fā)揮功能可以預防自身免疫性疾病，但也會阻止免疫系統攻擊癌細胞，造成腫瘤進展。通過流式細胞技術檢測PD-1表達，可以反映腫瘤進展情況。多項研究顯示，PD-1在腫瘤患者的外周血CD8+T細胞表面過表達，并與患者的病理變化及臨床療效密切相關。CD8+PD-1+T 細胞在癌患者外周中的比例明顯增加,且晚期患者的CD8+PD-1+ T細胞水平高于早期癌患者,由此提示PD-1分子在癌患者外周血CD8+ T 細胞中的應答水平發(fā)生改變,并與患者疾病的進展密切相關。
實驗材料與方法
檢測方法：
樣本制備：
1. 消化酶制備單細胞懸液，并過濾；
2. 裂解紅細胞，1 mL 1X RBC裂解紅細胞,室溫10 min(根據廠家推薦)；
3. 清洗：加入1 ml染色緩沖液，350g，離心5 min，棄上清；
4.可重復步驟4；
5. 染色：根據廠家推薦用量進行染色，室溫避光孵育20 min；
6. 清洗：加入1 ml染色緩沖液，350g，離心5 min，棄上清；
7.加入200-300 ul染色緩沖液，重懸后上機檢測。
實驗結果：
數據結果
圈門邏輯：
腫瘤組織中先圈出白細胞的信號CD45+（圖A），再圈總的CD3+T細胞（圖B），再分別看CD4（圖C）、CD8（圖D）、NK和NKT（圖E）在淋巴細胞中的占比，最重要的是看PD-1在淋巴的CD3+T細胞的雙陽信號（圖F）。腫瘤組織中淋巴細胞的占比會下降，特別是發(fā)展到后期，白細胞整體降低，PD-1在CD3+T中信號明顯。PD-1在CD8+T細胞中表達水平較低。
結果分析總結：
腫瘤組織中，淋巴細胞亞群傾向百分比降低、分群不明顯，但是此次檢測T細胞分群基本明顯。
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