MicroPulite®️ Perfect T3色譜柱應(yīng)用案例：食品中抗壞血酸的測定

什么是維生素C，它有什么作用？
維生素C，也稱為抗壞血酸，是一種水溶性營養(yǎng)素，存在于某些食物中。在體內(nèi)，它作為一種抗氧化劑，有助于保護(hù)細(xì)胞免受自由基造成的損害。自由基是當(dāng)我們的身體將我們吃的食物轉(zhuǎn)化為能量時形成的化合物。人們還會暴露于環(huán)境中的自由基，包括香煙煙霧、空氣污染和來自太陽的紫外線。  
目前如何檢測食品中維生素C的含量？
目前現(xiàn)行有效的國標(biāo)GB 5009.86-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)《食品中抗壞血酸的測定》有三種方法進(jìn)行檢測，包括第一法：高效液相色譜法、第二法：熒光法、第三法：2,6-二氯靛酚滴定法。其中高效液相法為最常用方法。
國標(biāo)方法維生素C圖譜

儀器參考條件
色譜柱：C18柱，柱長250mm，內(nèi)徑4.6mm，粒徑 5μm，或同等性能的色譜柱 
檢測器：二極管陣列檢測器或紫外檢測器 
檢測波長：245nm
流速：0.7 mL/min                 
柱溫：25 ℃進(jìn)樣體積：20μL                               
 流動相：A相：6.8g磷酸二氫鉀和0.91g十六烷基三甲 基溴化銨，用水溶解并定容至1L（用磷酸調(diào)pH至2.5~2.8）
B相：100%甲醇
按 A∶B=98∶2混合，過0.45μm 濾膜，超聲脫氣

色譜圖：
結(jié)論：由于標(biāo)準(zhǔn)中流動相水相含量高達(dá)98%，故不能選用普通C18進(jìn)行實驗，只能選用耐水性C18柱子（具體能否進(jìn)高水相可咨詢色譜柱廠家）。國標(biāo)5009.86中維生素C分為L型、D型兩種異構(gòu)體，兩者間出峰時間相近，根據(jù)上述圖譜隨著針數(shù)的增加，保留時間一直往后推，且濃度越高分離度越來越低。查詢文獻(xiàn)可知，十六烷基三甲基溴化銨為離子對試劑對于色譜柱損傷較大，并且水相太高對于柱子填料的選擇性影響較大，增加有機(jī)比例兩者分離度變差，故本公司對流動相和色譜柱進(jìn)行摸索改進(jìn)。
 
客戶改進(jìn)方法后維生素C圖譜
色譜柱：MicroPulite®️ Perfect T3
4.6*150mm 3.0μm（貨號：PFTT3-154630）
檢測器：245nm                                 
流速：0.6 mL/min                 
柱溫：25 ℃進(jìn)樣體積：20μL                                 
流動相：0.1%磷酸水溶液:甲醇=99:1
色譜圖：
結(jié)論：
1. 由于維生素C在酸性條件下穩(wěn)定性較好，故流動相考慮使用0.1%磷酸水溶液代替低pH緩沖鹽溶液，該方法在不使用離子對試劑下，保留時間與分離度穩(wěn)定性好，連續(xù)進(jìn)樣多針后保留時間RSD在1%內(nèi)分離度維持在2.7~2.8之間，方法簡單穩(wěn)定可靠。
2. 維生素C為水溶性營養(yǎng)物，在高水相酸性條件要求苛刻，故選用適應(yīng)范圍較廣、耐水性高的微純生物科技MicroPulite®️ Perfect T3色譜柱作為本實驗色譜柱。同時對比A公司SB-C18、Y公司AQ-C18，其選擇性最好。