緩沖液、培養(yǎng)基及各類常用溶液的配制方法合集

實(shí)驗(yàn)室中常常使用的各類溶液種類繁多，且配制方法五花八門，是否挑花眼了呢？今天小 M 替大家總結(jié)了近三十種常用溶液、緩沖液、培養(yǎng)基的配制方法，涵蓋了分子生物學(xué)、蛋白分析、細(xì)胞培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)等各個(gè)領(lǐng)域。

▐ 一、質(zhì)粒提取之 Solution I、II、III 

▐ 二、核酸電泳之 TBE、TAE 和 MOPS 緩沖液 

TBE、TAE 和 MOP‍S 作為實(shí)驗(yàn)室儲(chǔ)備溶液中最常見的幾種緩沖液，其緩沖能力與應(yīng)用場景卻有一些區(qū)別。TAE 的緩沖能力弱于 TBE，并且 TBE 跑膠分辨率高于 TAE。在應(yīng)用時(shí)，TBE 常用于小分子 DNA 片段電泳分析，TAE 適用于大分子 DNA 片段電泳分析及后續(xù)酶促實(shí)驗(yàn)，MOPS 則適用于更多 RNA 電泳分析。

▐ 三、蛋白電泳緩沖液

并且，蛋白電泳緩沖液分為變性與非變性緩沖液，區(qū)別在于變性緩沖液需加入 SDS 中和電荷。我們通常研究 WB、IP 時(shí)，使用變性緩沖液研究分子量大小即可，非變性緩沖液常用于研究蛋白空間結(jié)構(gòu)、等電點(diǎn)等。

▐ 四、上樣緩沖液

上樣緩沖液（Loading Buffer）是各類實(shí)驗(yàn)不可缺少的，可根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型選擇不同的 Buffer，以下展示 DNA 電泳 Loading Buffer、RNA 電泳 Loading Buffer 以及 SDS-PAGE Loading Buffer 的配制方法。

▐ 五、分子雜交常用溶液

分子雜交包含了核酸雜交和蛋白雜交，在實(shí)驗(yàn)過程中，各類常用溶液也是必不可少的一環(huán)。使用膜雜交法時(shí)，可選擇 Denhardt's 溶液，核酸雜交中變性和清洗，可選擇 SSC 溶液、 DNA 變性緩沖液。

▐ 六、蛋白清洗、轉(zhuǎn)膜常用溶液

蛋白分析的過程，少不了轉(zhuǎn)膜液、清洗液的參與。WB 轉(zhuǎn)膜液用于將印跡從凝膠轉(zhuǎn)印至膜上，TBST 緩沖液可以用于 WB、IF、IHC 等實(shí)驗(yàn)中封閉液、一抗或二抗配制以及抗體孵育后的洗滌，WB 封閉液則可用于減少非特異性抗體結(jié)合。

▐ 七、細(xì)胞培養(yǎng)常用平衡鹽溶液

平衡鹽溶液是細(xì)胞培養(yǎng)過程中的常見溶液。在選擇平衡鹽溶液時(shí)，PBS 主要用于胚胎、組織、細(xì)胞的漂洗、凍存和培養(yǎng)，而 HBSS 除了 PBS 的用途外，還可以用于細(xì)胞培養(yǎng)試劑的配制、細(xì)胞計(jì)數(shù)的稀釋，EBSS 緩沖能力最強(qiáng)，是專為 CO₂ 環(huán)境中的細(xì)胞短期維持而設(shè)計(jì)。

▐ 八、微生物培養(yǎng)常用溶液

在微生物培養(yǎng)中，LB 培養(yǎng)基當(dāng)屬最常見的，另外還有 Ampicillin 可用于篩選抗性菌，IPTG 一般用于藍(lán)白斑篩選，而 X-Gal 作為 β-半乳糖苷酶的顯色底物，常用于 β-半乳糖苷酶原位染色檢測及藍(lán)白斑篩選。



緩沖液的進(jìn)階知識(shí)點(diǎn)

緩沖溶液 (Buffer Solution) 通常指的是由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合溶液，作為分析化學(xué)當(dāng)中的重要概念，緩沖液的 pH 值在一定的范圍內(nèi)可以保持穩(wěn)定，不因稀釋或加入少量酸堿而發(fā)生 pH 的改變，可以廣泛應(yīng)用于各類實(shí)驗(yàn)中。

表 1. 常見緩沖液的緩沖范圍及 pKa。

▐ 緩沖液配制的常見問題

在緩沖液的配制過程中，容易出現(xiàn)以下幾個(gè)常見的問題，小 M 特地來給大家盤點(diǎn)一下，希望幫助大家不要出錯(cuò)~


本期小 M 為大家總結(jié)了實(shí)驗(yàn)室常見緩沖液的配制方法，為大家節(jié)約在實(shí)驗(yàn)中反復(fù)查資料的時(shí)間，快來收藏文章吧~