雙特異性抗體開發(fā)的制備方法及注意事項
雙特異性抗體開發(fā)（Bispecific Antibody Development）是指利用基因工程技術(shù)，將兩種單克隆抗體的結(jié)構(gòu)域連接在一起，形成同時能夠與兩種不同抗原結(jié)合的抗體。其原理基于兩種單克隆抗體的互補性決定，因此可以實現(xiàn)同時靶向多個受體、增強細胞殺傷作用、降低藥物劑量和代謝排泄等優(yōu)勢。
幾種常見雙特異性抗體結(jié)構(gòu)示意圖
制備方法一般有四種：二價抗體招募和交聯(lián)、熒光素酶免疫吸附測定（FLISA）、生物合成和基于重鏈縮合的抗體設(shè)計。其中，基于重鏈縮合的抗體設(shè)計是目前主要的制備方法之一，通過連接兩個單抗的重鏈，形成一個具有雙特異性結(jié)合抗原能力的蛋白質(zhì)。
方法：
1、二價抗體招募和交聯(lián)
原理：是一種制備雙特異性抗體的常見方法，原理是將兩個單克隆抗體分別與兩種不同的抗原結(jié)合，在二者之間形成連接。
步驟：1. 首先制備兩個單克隆抗體，分別與目標抗原A和B結(jié)合。對第一個單克隆抗體進行工程改造，添加一個連接區(qū)域，使其能夠與第二個單克隆抗體連接。
2. 對第二個單克隆抗體進行工程改造，添加一個連接區(qū)域，使其能夠與第一個單克隆抗體連接。將兩個工程改造后的單克隆抗體混合，通過二價抗體招募和交聯(lián)的方式，形成雙特異性抗體。
3. 進行純化、鑒定等后續(xù)處理，確保制備出的雙特異性抗體質(zhì)量符合要求。
特點：1、結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定、存儲條件要求較高
2、同時對于二元交聯(lián)部位的選擇也有一定的局限性，因此需要進行進一步的技術(shù)改進和優(yōu)化。
2、熒光素酶免疫吸附測定（FLISA）
原理：將兩個單克隆抗體通過連接器（linker）或者交聯(lián)劑（crosslinker）連接起來，形成雙特異性抗體。
步驟：1. 首先準備兩個單克隆抗體，分別與目標抗原A和B結(jié)合。
2. 在兩個單克隆抗體中選擇合適的標記物，如酵素、生物素等，標記在不同的位置上。
3. 準備連接器或交聯(lián)劑，將兩個標記的單克隆抗體連接在一起。
4. 經(jīng)過純化、鑒定等后續(xù)處理，得到雙特異性抗體。
5. 雙特異性抗體可以用于診斷試劑、治療藥物等方面的應用。
特點：1、具有很高的穩(wěn)定性和生物活性
2、但在制備過程中需要對連接器和交聯(lián)劑的選擇進行仔細的考慮，以保證制備出的雙特異性抗體的質(zhì)量和效力
3、需要注意其作用機制和適應癥，以避免不必要的風險和副作用
3、生物合成
原理：利用細胞表面或質(zhì)膜上的重組蛋白將兩個單克隆抗體結(jié)合成雙特異性抗體。
步驟：1. 選擇合適的載體和宿主細胞，構(gòu)建含有兩個單克隆抗體基因的表達載體，使其可以在細胞內(nèi)生物合成。
2. 將構(gòu)建好的載體轉(zhuǎn)染到宿主細胞中，使其表達重組蛋白。
3. 因為兩個單克隆抗體基因分別搭載在不同的載體上，因此需要將宿主細胞進行交配，使得兩個不同基因的細胞融合在一起。
4. 交配后的細胞可在培養(yǎng)基中篩選出雙特異性抗體陽性細胞，并進行進一步的鑒定和純化。
特點：1、穩(wěn)定性高、生物活性好
2、制備過程相對較為復雜，需要考慮基因的相互作用等多方面因素，以保證雙特異性抗體的質(zhì)量和效力
3、需要密切關(guān)注其作用機制和適應癥，以避免不必要的風險和副作用
4、基于重鏈縮合的抗體設(shè)計
原理：通過重鏈縮合的方式將兩個單克隆抗體結(jié)合成一個分子，形成雙特異性抗體。
步驟：1. 首先準備兩個單克隆抗體，并進行分離其重鏈和輕鏈。
2. 在重鏈中選擇合適的區(qū)域進行縮合，將兩個重鏈通過這個區(qū)域連接在一起，形成一個新的重鏈。
3. 將縮合后的重鏈與其原來搭配的輕鏈重新組合，得到新的雙特異性抗體分子。
4. 進行后續(xù)的篩選、鑒定和純化等處理，得到高質(zhì)量的雙特異性抗體。
特點：1、結(jié)構(gòu)簡單、穩(wěn)定性強
2、縮合的位置需要進行仔細的選擇和優(yōu)化，以保證雙特異性抗體的質(zhì)量和效力
3、需要注意其作用機制和適應癥，以避免不必要的風險和副作用
制備雙特異性抗體注意事項包括：
1. 制備雙特異性抗體需要高水平的技術(shù)實力和嚴格的質(zhì)量控制。
2. 需要對雙特異性抗體進行嚴格的安全性和有效性評估。
3. 雙特異性抗體與細胞間的相互作用和代謝過程需要進一步深入研究。
區(qū)分雙特異性抗體的結(jié)構(gòu)和功能特點，以便在臨床應用中更好地使用。
