分子相互作用相互儀在小分子藥物與人血清白蛋白相互作用方面的應(yīng)用

簡介
       人血清白蛋白(HSA)是血漿中最重要的蛋白質(zhì)，其含量豐富。HSA的主要功能是攜帶脂肪酸和維持血液膠體滲透壓，是許多激素和藥物尤其是疏水藥物的重要載體。藥物與HSA結(jié)合增加了藥物的半衰期，降低了血液中游離藥物的濃度，對臨床護(hù)理具有極其重要的意義。在藥物發(fā)現(xiàn)早期，確定血漿蛋白結(jié)合是很重要的，因?yàn)樗�用于評估藥物的劑量需求和從體內(nèi)的清除。
 
材料和方法
       羧基甲基葡聚糖(CMD)包被的傳感器載玻片通過胺偶聯(lián)化學(xué)固定HSA(圖2)。固定在21°C下進(jìn)行，使用5 mM MES (2-(N-morpholino)乙磺酸)pH 5.0作為運(yùn)行緩沖液。表面用EDC/NHS活化，用5mM乙醇胺(pH 8.0)滅活。        采用SPR Navi 220A型儀器測定小分子藥物吲哚美辛、奎尼丁和萘普生(357.8、324.4和230.3 g/mol)與固定化HSA的相互作用。實(shí)驗(yàn)采用pH為7.4的PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)作為運(yùn)行緩沖液，溫度為21℃。測量5個(gè)樣品濃度系列(0.1 ~ 50 μM)�？�尼丁是較弱的結(jié)合劑，因此測定了較高的濃度(10 ~ 500 μM)。樣品中含有3%的二甲基亞砜(DMSO)，以提高藥物的溶解度。用TraceDrawer分析了反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)和親和性。

結(jié)果和討論
       根據(jù)BioNavis固定方案，成功重復(fù)多次固定化HSA。傳感器表面固定HSA的平均量為2000 ng/cm²。通過MP-SPR測量，成功測定了三種小分子量藥物對HSA的穩(wěn)態(tài)親和力和結(jié)合動(dòng)力學(xué)(表1)。吲哚美辛的親和力圖和動(dòng)力學(xué)分析如圖3和圖4所示。分別測定兩次奎尼丁的結(jié)合度，得到的等結(jié)合值證實(shí)了結(jié)果的重復(fù)性。
 
結(jié)論
       MP-SPR儀器是測量小分子直接親和力的優(yōu)良工具。通過儀器的實(shí)時(shí)和無標(biāo)簽測量，不僅可以有效地確定結(jié)合的穩(wěn)態(tài)，還可以有效地確定結(jié)合的動(dòng)力學(xué)。這些類型的測量可用于臨床前藥物篩選和生化藥物開發(fā)。