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生物芯片點(diǎn)樣儀助力植物同土壤中鹽度相關(guān)性研究

瀏覽次數(shù):298 發(fā)布日期:2024-8-2  來(lái)源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
Arrayjet生物芯片點(diǎn)樣儀助力植物同土壤中鹽度相關(guān)性研究


土壤鹽堿化是一個(gè)日益嚴(yán)重的環(huán)境問(wèn)題,過(guò)量的鹽分損害土壤的養(yǎng)分吸收、破壞滲透平衡,對(duì)植物生長(zhǎng)、發(fā)育和開(kāi)花產(chǎn)生負(fù)面影響,導(dǎo)致作物產(chǎn)量下降。 為應(yīng)對(duì)自身或外部刺激,植物會(huì)通過(guò)細(xì)胞壁修飾(包括木質(zhì)素和木栓素沉積的增加,以及在較老的組織中形成次級(jí)細(xì)胞壁)和改變根的生長(zhǎng)方向,以減少鹽分的攝入。在此過(guò)程中還涉及到纖維素合成、纖維素微纖維定位、半乳聚糖積累以及合成阿拉伯糖等生物過(guò)程。已有研究表明,延伸蛋白(extensin)糖基化是這個(gè)過(guò)程中的關(guān)鍵因素,其中涉及到4種糖基化蛋白(HPAT1-3、RRA1-3、XEG113和ExAD),但具體的參與過(guò)程仍缺乏了解。


荷蘭瓦赫寧根大學(xué)植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)室的研究團(tuán)隊(duì)于2024年在《Plant》雜志發(fā)表了文章《Arabinosylation of cell wall extensin is required for the directional response to salinity in roots》。在該研究中,作者通過(guò)研究野生型和ExAD基因突變型擬南芥樣本的果膠和半纖維素提取物,證實(shí)ExAD 基因是調(diào)節(jié)根定向生長(zhǎng)所必需的,揭示了 ExAD 介導(dǎo)的阿拉伯糖基化在根對(duì)鹽脅迫的反應(yīng)中起著至關(guān)重要的作用。

實(shí)驗(yàn)方法:
  • 1.鹽誘導(dǎo)傾斜測(cè)定法(salt-induced tilting assay ,SITA):將擬南芥培育發(fā)芽,并在響應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)移植到不同類型的培養(yǎng)基(無(wú)NaCl 、100mM NaCl 、100mM KCl 和 200mM 山梨糖醇等)中,并將植株逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)90度,然后持續(xù)動(dòng)態(tài)拍照,觀察植物根部的生長(zhǎng)彎曲過(guò)程(圖1)。根尖角度(root tip direction,RTD)表示平行于根尖生長(zhǎng)方向的矢量與垂直重力矢量之間的角度,表示根尖彎曲的量。

圖1 SITA的實(shí)驗(yàn)設(shè)置:將發(fā)芽的幼苗轉(zhuǎn)移到含有不同處理的1/2 MS瓊脂平板中,同時(shí)將平板逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)90度;在延時(shí)系統(tǒng)中追蹤根系動(dòng)態(tài)生長(zhǎng)響應(yīng),成像頻率為每塊板每 20 分鐘 1 張圖像
 
  • 2.微陣列聚合物分析(Comprehensive Microarray Polymer Profiling,CoMPP):將樣本擬南芥幼苗快速凍干。繼而純化,通過(guò)Arrayjet公司的Marathon(新型號(hào)Mecury)生物芯片點(diǎn)樣儀點(diǎn)印在硝酸纖維素膜上,隨后同特異性抗體雜交,生物芯片掃描儀掃描并進(jìn)行結(jié)果分析。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
  • 1.野生型擬南芥在100mM NaCl 培養(yǎng)基中表現(xiàn)出明顯的生長(zhǎng)彎曲。與對(duì)照組、100mM KCl 和 200nM 山梨糖醇組相比,在100mM NaCl 培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的擬南芥的根尖RTD的變化量顯著降低,說(shuō)明高濃度NaCl 的確可以影響植物根尖生長(zhǎng)方向(圖2)。

圖2 在不同處理(對(duì)照組、100 mMNaCl、100mM KCl 和 200mM 山梨糖醇)下,在 4 日齡野生型幼苗根尖不同時(shí)間點(diǎn)延時(shí)拍照,y軸表示每 20 分鐘根尖的RTD 值
 
  • 2.相對(duì)于野生型,ExAD突變型擬南芥在NaCl溶液中根尖RTD值的變化量顯著降低,說(shuō)明ExAD突變導(dǎo)致根尖回避高鹽環(huán)境的能力減弱。
  • 3.相較于野生型,ExAD突變型樣本在凍干后的提取物中NaCl含量顯著升高,說(shuō)明ExAD基因突變導(dǎo)致植株攝取了過(guò)量的NaCl。
  • 4.CoMPP實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,野生型植株的JIM11雜交信號(hào)顯著高于ExAD突變型,而JIM11是延伸蛋白糖基化的重要指征,說(shuō)明ExAD突變型植株的延伸蛋白缺乏糖基化,引起根尖遇到高鹽溶液后彎曲能力降低。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論:

ExAD引起延伸蛋白糖基化,參與鹽脅迫條件下的根細(xì)胞壁修飾,該過(guò)程是調(diào)節(jié)根尖定向生長(zhǎng)所必需的。綜合以上結(jié)果說(shuō)明 ExAD 介導(dǎo)的阿拉伯糖基化在根對(duì)鹽脅迫的反應(yīng)中起著至關(guān)重要的作用。

原文鏈接:https://doi.org/10.1093/plcell/koae135

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