HUVEC人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)及培養(yǎng)指南
人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 (HUVEC)，是從臍帶靜脈中分離出來(lái)的原代細(xì)胞。這種細(xì)胞是研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞的模型系統(tǒng)，研究相關(guān)的低氧、炎癥、氧化應(yīng)激、感染反應(yīng)以及正常和腫瘤相關(guān)血管生成等應(yīng)用。
HUVEC細(xì)胞形態(tài)：
內(nèi)皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)，鵝卵石狀外觀，核大而暗；
在增殖過(guò)程中，細(xì)胞小且大小均勻，有絲分裂指數(shù)高，無(wú)平滑肌細(xì)胞。
細(xì)胞形態(tài)圖如下：
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
接下來(lái)，小喬給大家分享一下HUVEC詳細(xì)培養(yǎng)指南（ 以T25培養(yǎng)瓶為例）：
培養(yǎng)HUVEC相關(guān)產(chǎn)品推薦
1.細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿包被處理攻略
很多小伙伴認(rèn)為沒(méi)有包被培養(yǎng)瓶似乎對(duì)培養(yǎng)影響不大，這里小喬建議大家，復(fù)蘇和傳代均需要包被，包被后的細(xì)胞長(zhǎng)的更圓潤(rùn)飽滿傳代后的貼壁率也會(huì)有所提高。
1、在開(kāi)始操作程序前，提前準(zhǔn)備好所需要的試劑，重組人纖連蛋白、pbs磷酸緩沖液，離心管、移液槍、培養(yǎng)瓶等，以確保盡快完成解凍程序。
2、以 T25 培養(yǎng)瓶為例:吸取2.5mlPBS磷酸鹽緩沖液轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶中，再將100ul移液槍調(diào)到50，吸50ul重組人纖連蛋白加入到T25培養(yǎng)瓶中，加完之后要混勻鋪滿整個(gè)瓶子底部 ；
包被時(shí)間:過(guò)夜(12-16h)，至少也需 37℃,2h 以上。
注意事項(xiàng)：細(xì)胞復(fù)蘇或傳代之前培養(yǎng)瓶需提前2小時(shí)包被。
2.HUVEC細(xì)胞解凍復(fù)蘇攻略
1、提前室溫平衡人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基。
2、準(zhǔn)備一個(gè)包被好的培養(yǎng)瓶,把剩余包被液吸盡后加入5ml的dpbs 清洗一遍倒掉,再添加 5ml 室溫平衡完全培養(yǎng)基，同時(shí)準(zhǔn)備一個(gè)15mL離心管,添加5ml含10%血清的其他培養(yǎng)基(用于離心）。
3、將凍存管快速在37℃水浴槽中解凍HUVEC細(xì)胞,至細(xì)胞完全融化(請(qǐng)?jiān)?-2分鐘內(nèi)完成)。
4、立即取出凍存管75%乙醇擦拭消毒凍存管表面，轉(zhuǎn)移至生物安全柜，將細(xì)胞懸液加入到提前準(zhǔn)備好的離心管里。
5、在室溫，200g(1000rpm)離心5min。
6、棄去上清 ,用手指彈松細(xì)胞沉淀 ,添加 2ml完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞后，接種至1個(gè)T25培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶中總共完培5-7ml。“畫(huà)8字法”使細(xì)胞均勻分布。
7、在 37℃、5%CO2 和 95%空氣條件下進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),透氣瓶可直接放入培養(yǎng)箱，非透氣請(qǐng)擰松放入培養(yǎng)箱。
8、在復(fù)蘇后第二天16h后可觀察貼壁情況,有少量漂浮可以不用換液,約3-4天可進(jìn)行傳代。
3.HUVEC傳代攻略：
注意：當(dāng)HUVEC細(xì)胞密度達(dá)到85%-95%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。
1、棄去培養(yǎng)液,用 PBS 洗滌 1-2次;
2、將 Trypsin-EDTA.(0.05%)(中喬新舟 貨號(hào): CSP048)、 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基、含 10%FBS 其它培養(yǎng)基(用于終止液)置于室溫平衡。
3、棄去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基,用 5ml 無(wú)鈣鎂離子 PBS 緩沖液(中喬新舟 貨號(hào):ZQ-1300)清洗細(xì)胞層盡量去除液體后加入 1ml 的 0.05%胰酶消化液 37℃消化至細(xì)胞變圓,用手輕拍瓶尾成流沙樣脫落;脫落率約 80%。
4、此時(shí),立即加入3-5ml其他完培培養(yǎng)基(含10%血清)終止消化,輕柔吹打瓶?jī)?nèi)3-6下,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15ml離心管,200g(1000rpm)室溫離心5min;
5、棄上清，用手指彈松細(xì)胞細(xì)胞沉淀，加入新鮮完全培養(yǎng)基后視推薦傳代比例和細(xì)胞計(jì)數(shù)后進(jìn)行接種若干新的T25培養(yǎng)瓶中;培養(yǎng)基t25添加5-7ml；
6、每2天更換一次培養(yǎng)基。
HUVEC細(xì)胞形態(tài)：
內(nèi)皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)，鵝卵石狀外觀，核大而暗；
在增殖過(guò)程中，細(xì)胞小且大小均勻，有絲分裂指數(shù)高，無(wú)平滑肌細(xì)胞。
細(xì)胞形態(tài)圖如下：
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
接下來(lái)，小喬給大家分享一下HUVEC詳細(xì)培養(yǎng)指南（ 以T25培養(yǎng)瓶為例）：
培養(yǎng)HUVEC相關(guān)產(chǎn)品推薦
1.細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿包被處理攻略
很多小伙伴認(rèn)為沒(méi)有包被培養(yǎng)瓶似乎對(duì)培養(yǎng)影響不大，這里小喬建議大家，復(fù)蘇和傳代均需要包被，包被后的細(xì)胞長(zhǎng)的更圓潤(rùn)飽滿傳代后的貼壁率也會(huì)有所提高。
1、在開(kāi)始操作程序前，提前準(zhǔn)備好所需要的試劑，重組人纖連蛋白、pbs磷酸緩沖液，離心管、移液槍、培養(yǎng)瓶等，以確保盡快完成解凍程序。
2、以 T25 培養(yǎng)瓶為例:吸取2.5mlPBS磷酸鹽緩沖液轉(zhuǎn)移到T25培養(yǎng)瓶中，再將100ul移液槍調(diào)到50，吸50ul重組人纖連蛋白加入到T25培養(yǎng)瓶中，加完之后要混勻鋪滿整個(gè)瓶子底部 ；
包被時(shí)間:過(guò)夜(12-16h)，至少也需 37℃,2h 以上。
注意事項(xiàng)：細(xì)胞復(fù)蘇或傳代之前培養(yǎng)瓶需提前2小時(shí)包被。
2.HUVEC細(xì)胞解凍復(fù)蘇攻略
1、提前室溫平衡人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基。
2、準(zhǔn)備一個(gè)包被好的培養(yǎng)瓶,把剩余包被液吸盡后加入5ml的dpbs 清洗一遍倒掉,再添加 5ml 室溫平衡完全培養(yǎng)基，同時(shí)準(zhǔn)備一個(gè)15mL離心管,添加5ml含10%血清的其他培養(yǎng)基(用于離心）。
3、將凍存管快速在37℃水浴槽中解凍HUVEC細(xì)胞,至細(xì)胞完全融化(請(qǐng)?jiān)?-2分鐘內(nèi)完成)。
4、立即取出凍存管75%乙醇擦拭消毒凍存管表面，轉(zhuǎn)移至生物安全柜，將細(xì)胞懸液加入到提前準(zhǔn)備好的離心管里。
5、在室溫，200g(1000rpm)離心5min。
6、棄去上清 ,用手指彈松細(xì)胞沉淀 ,添加 2ml完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞后，接種至1個(gè)T25培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)瓶中總共完培5-7ml。“畫(huà)8字法”使細(xì)胞均勻分布。
7、在 37℃、5%CO2 和 95%空氣條件下進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),透氣瓶可直接放入培養(yǎng)箱，非透氣請(qǐng)擰松放入培養(yǎng)箱。
8、在復(fù)蘇后第二天16h后可觀察貼壁情況,有少量漂浮可以不用換液,約3-4天可進(jìn)行傳代。
3.HUVEC傳代攻略：
注意：當(dāng)HUVEC細(xì)胞密度達(dá)到85%-95%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。
1、棄去培養(yǎng)液,用 PBS 洗滌 1-2次;
2、將 Trypsin-EDTA.(0.05%)(中喬新舟 貨號(hào): CSP048)、 內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基、含 10%FBS 其它培養(yǎng)基(用于終止液)置于室溫平衡。
3、棄去培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基,用 5ml 無(wú)鈣鎂離子 PBS 緩沖液(中喬新舟 貨號(hào):ZQ-1300)清洗細(xì)胞層盡量去除液體后加入 1ml 的 0.05%胰酶消化液 37℃消化至細(xì)胞變圓,用手輕拍瓶尾成流沙樣脫落;脫落率約 80%。
4、此時(shí),立即加入3-5ml其他完培培養(yǎng)基(含10%血清)終止消化,輕柔吹打瓶?jī)?nèi)3-6下,將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到15ml離心管,200g(1000rpm)室溫離心5min;
5、棄上清，用手指彈松細(xì)胞細(xì)胞沉淀，加入新鮮完全培養(yǎng)基后視推薦傳代比例和細(xì)胞計(jì)數(shù)后進(jìn)行接種若干新的T25培養(yǎng)瓶中;培養(yǎng)基t25添加5-7ml；
6、每2天更換一次培養(yǎng)基。
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