賽默飛高效液相色譜儀HPLC使用說明書

1. 開機(jī)（軟件）：雙擊“控制器”，點(diǎn)擊“啟動(dòng)儀器控制”，待儀器顯示“運(yùn)行空閑”，雙擊“變色龍軟件7”進(jìn)入色譜工作站，工作站左上角“模塊狀態(tài)”顯示“Connected”，表示連接成功。

2. 排氣：打開輸液泵的蓋子，找到輸液泵的排氣閥，擰松排氣閥（逆時(shí)針）擰松一圈半到兩圈，將A流動(dòng)比例設(shè)為100%，泵流速設(shè)為3ml/min（具體自己定），點(diǎn)擊沖洗按鈕，在排氣閥打開的情況下忽略警告執(zhí)行。重復(fù)上述操作，分別進(jìn)行b、c、d流路的排氣操作，一般排氣60s。在此期間觀察各流路軟管內(nèi)是否有氣泡，確保氣泡完全排除。結(jié)束后再次點(diǎn)擊沖洗按鈕，停止排氣，擰緊排氣閥。（此處要注意，在擰緊排氣閥之前，一定要將流速降低，確保壓力在正常范圍小于150bar）

在加樣前，選擇自動(dòng)進(jìn)樣器選項(xiàng)，依次進(jìn)行灌注注射器、清洗緩沖環(huán)、外部清洗針。

3. 創(chuàng)建儀器方法：點(diǎn)擊創(chuàng)建 → 選擇儀器方法 → 設(shè)定運(yùn)行時(shí)間（） → 取消選擇所有通道 → 點(diǎn)擊下一步 → 編寫各瓶溶劑名稱 → 下一步 → 刪除平衡階段 → 編寫儀器方法（每一個(gè)時(shí)間不代表區(qū)間，僅代表著該時(shí)間點(diǎn)的流速以及各相比例） → 下一步 → 采用默認(rèn)的進(jìn)樣針參數(shù) → 下一步 → 采用默認(rèn)的進(jìn)樣模式 → 下一步 → 進(jìn)行溫度控制（具體自己設(shè)，本實(shí)驗(yàn)條件為30℃） → 下一步 → 設(shè)置波長(zhǎng)信號(hào) → 直至完成，在方法界面里，左上角保存改儀器方法。

4. 平衡基線：流速設(shè)為1ml/min，有機(jī)相：流動(dòng)相比例設(shè)置為（自己設(shè)），點(diǎn)擊馬達(dá)，啟動(dòng)輸液泵；點(diǎn)擊UV選項(xiàng)，設(shè)置波長(zhǎng)，點(diǎn)擊紫外燈，點(diǎn)燈成功會(huì)有打鉤。 有機(jī)相與流動(dòng)相比例不斷進(jìn)行調(diào)整，直到進(jìn)樣需要的條件，本實(shí)驗(yàn)從100%有機(jī)相到20%有機(jī)相。

5. 處理方法的創(chuàng)建：選擇創(chuàng)建菜單下的處理方法，選擇基本定量 → 下一步 → 命名處理方法并保存 → 打開 → 完成。 采用儀器的默認(rèn)數(shù)據(jù)處理方法。

6. 樣品檢測(cè)：序列創(chuàng)建：創(chuàng)建菜單 → 序列 → 編寫相關(guān)信息 → 下一步 → 瀏覽 → 選擇建好的儀器方法和處理方法 → 下一步直至完成，命名序列并完成。待到基線平衡后，在數(shù)據(jù)點(diǎn)擊開始運(yùn)行�？梢栽�儀器操作界面看到當(dāng)前情況。（此處要注意隊(duì)列中前面的隊(duì)列已完成）

7. 清洗柱子（清洗色譜儀先水洗，后醇洗，柱子需要保存在100%有機(jī)相中，分為快洗和慢洗，此處描寫快洗方法，需要時(shí)刻注意壓力值）：快洗：先將調(diào)到100%醇:0%水 → 0%醇:100%水 → 100%醇0%水進(jìn)行柱子保存。

（打開UV界面的紫外燈，再打開位于界面最上方的基線監(jiān)視）

慢洗：創(chuàng)建儀器方法同上，運(yùn)行時(shí)間盡可能大，在編寫儀器方法時(shí)，可嘗試如下編寫。（0min時(shí)各相比例應(yīng)與HPLC工作時(shí)的比例相同；需確保各相試劑充足；具體流速需根據(jù)A:B=1：1時(shí)進(jìn)行調(diào)整，此比例下柱壓最大）