affinite SPR分子互作儀在蛋白-肝素相互作用分析中的應用
在分子生物學和生物化學研究中，理解生物分子之間的動態(tài)相互作用對于揭示其功能與機理至關重要。表面等離子體共振（SPR）技術因其實時動態(tài)無標記監(jiān)測分子互作，已經成為研究這些相互作用的關鍵工具。Affinité 公司是一家專業(yè)的SPR儀研發(fā)生產企業(yè)，提供多種型號SPR儀器，可滿足實驗室及現(xiàn)場分析需求。
Affinité SPR儀——P4PRO
利物浦大學和基爾大學的研究團隊在最新發(fā)表的研究中，基于Affinité 的標準金膜涂層芯片，開發(fā)了一種新的傳感器表面修飾方法，并成功應用于Affinité SPR儀，檢測肝素小分子與蛋白間相互作用。這樣的傳感器表面可以批量制備、保存，進一步拓展了Affinité SPR儀器的應用。
關鍵詞
肝素，表面等離子體共振，蛋白質-多糖相互作用，酶競爭性抑制，生物素化肝素捕獲
圖1 OEG 自組裝單層以及隨后捕獲鏈霉親和素和生物素化配體的示意圖
材料與方法
生物素化肝素的制備
研究團隊使用羥胺生物素對豬腸肝素進行了還原端生物素化，這一過程確保了產物的穩(wěn)定性。37°C下反應48小時，去除未反應的生物素并更換緩沖液。
傳感器表面修飾與功能化
在傳感器金膜表面修飾硫醇油基乙二醇/生物素硫醇油基乙二醇單分子層，孵育鏈霉親和素，再通過鏈霉親和素捕獲還原端生物素化的肝素。這種方法確保了傳感器表面的高穩(wěn)定性和低非特異性結合。
圖 2 在biotin-OEG/OEG 自組裝單層膜上捕獲鏈霉親和素、固定還原端生物素化的肝素
研究亮點
高效檢測肝素結合蛋白
研究團隊通過Affinité SPR儀器成功檢測了成纖維細胞生長因子2（FGF2）與肝素的結合。這一實驗驗證了新型傳感器表面的有效性和穩(wěn)定性。
圖 3 FGF2 和 GST-HS3ST3A1 與肝素衍生物的結合
圖 4 可溶性肝素誘導的解離
酶競爭性抑制研究
研究展示了對肝素硫酸磺基轉移酶（HS3ST3A1）競爭性的分析，發(fā)現(xiàn)選擇性修飾的肝素衍生物和蘇拉明能夠有效競爭酶的糖受體位點。這一發(fā)現(xiàn)有助于深入了解酶對多糖中硫酸化結構的選擇性。
圖 5 肝素衍生物競爭 HS3STA1 與肝素的結合
圖 6 蘇拉明競爭 GST-HS3ST3A1 與肝素的結合
多功能傳感器
該傳感器表面不僅可以用于肝素，還可以應用于研究其他類似的多糖，這為研究許多內源性蛋白質和病毒與宿主細胞相互作用提供了新工具。
研究意義
這種生物素功能化表面在生物醫(yī)藥研究中有廣泛的應用潛力，特別是在研究蛋白質-多糖相互作用、酶抑制劑篩選以及病毒與宿主細胞相互作用方面。Affinité SPR儀器的應用使得現(xiàn)場分析更加便捷，為未來的生物醫(yī)學研究提供了更多可能性。
Affinité P4PRO分子互作儀
加拿大Affinité Instruments是一家專注于分子互作研究的公司，基于無標記、高靈敏、表面等離子共振技術（SRP技術）開發(fā)了性價比極高的個人型分子互作儀，旨在讓每位科研工作者和實驗室都能夠順利的把分子互作相關實驗開展起來，助力生物科學發(fā)展。
P4PRO是Affinité Instruments最暢銷的一款分子互作儀，其特點是
- 基于SPR原理，實時、無標記、檢測相互作用；
- 搭配先進的微流控技術，實現(xiàn)高性能和高準確性；
- 10分鐘內完成1個樣本測試；
- 一組實驗可獲得結合特異性、親和力、動力學等數(shù)據(jù)；
- 四通道檢測，結合參照通道信號，可進行背景扣除，獲得可信數(shù)據(jù)；
- 儀器穩(wěn)定，操作簡單，維護簡便；
- 采用注射泵組件，控制精準，信號穩(wěn)定；
- 儀器性價比高，單個實驗室即可負擔；
- AfficoatTM芯片可減少SPR試驗中的非特異性結合；
- 芯片耗材成本低，大大降低儀器運行成本。
