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賽默飛TSQ Plus系列液質(zhì)聯(lián)用儀助力多肽及核酸藥物定量分析

瀏覽次數(shù):222 發(fā)布日期:2024-10-14  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負

 
多肽及核酸類藥物

多肽類藥物和核酸類藥物憑借其獨特的藥理作用和廣闊的市場前景,成為當前醫(yī)藥市場的兩大熱門細分領(lǐng)域。隨著我國鼓勵創(chuàng)新藥研發(fā)相關(guān)政策的出臺,未來會有更多的具有顯著臨床效果的多肽與核酸類創(chuàng)新藥和仿制藥獲批上市。多肽與核酸類藥物具備無限的潛力。賽默飛TSQ Plus系列三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用儀以其出色的定量能力,能為多肽與核酸類藥物的定量檢測提供保障。下邊本作者將從多肽及核酸類藥物應(yīng)用案例出發(fā)來介紹。
 
TSQ Plus系列三重四極桿質(zhì)譜
 
多肽藥物作為一種新興的治療手段,不僅具有高活性和強選擇性,能精準靶向疾病相關(guān)受體。而且在免疫原性方面相對較低,減少了不必要的免疫反應(yīng)。司美格魯肽能夠有效控制血糖水平,抑制腸蠕動、增加飽腹感,抑制食欲。近年來成為肥胖患者的新寵。本節(jié)應(yīng)用方案建立了血漿中司美格魯肽的檢測方法。
 
司美格魯肽4電荷態(tài)下TSQ Plus系列質(zhì)譜優(yōu)化界面(注意電荷量)
 
實驗中采用1:3乙腈蛋白沉淀后直接進樣的前處理方式,進樣5μL,靈敏度良好,線性1ng/mL-500ng/mL線性關(guān)系良好,兩種電荷態(tài)下司美格魯肽線性判定系數(shù)r2均在0.996以上。各校正點偏差均在10%以內(nèi)。1ng/mL血漿樣品經(jīng)蛋白沉淀處理后6針穩(wěn)定性RSD為3.67%。
 
5ng/mL的實際濃度樣品4電荷下特征譜圖
 
5ng/mL的實際濃度樣品3電荷下特征譜圖
  
實驗中建立了LCMS聯(lián)用檢測血漿中的司美格魯肽的分析方法,LOQ實際濃度達到1ng/mL進樣5μL。

在多肽藥物發(fā)展的同時,核酸藥物的發(fā)展也備受關(guān)注。核酸類藥物從源頭干預(yù)疾病發(fā)生發(fā)展,成為近年來醫(yī)藥領(lǐng)域的研究熱點。本節(jié)小作者采用實際核酸樣品在TSQ Plus系列質(zhì)譜上測試實驗為例來闡述。某4電荷的核酸在2ng/mL血漿中經(jīng)液液萃取后,實際濃度0.4ng/mL進樣5μL,信噪比等于38.6,滿足定量需求,6針穩(wěn)定性良好,RSD在4%以內(nèi)。
 
某4電荷的核酸2ng/mL(實際濃度0.4ng/mL)血漿加標樣特征譜圖
 
核酸2ng/mL-1000ng/mL(實際濃度0.4ng/mL-200ng/mL)血漿加標樣標曲,判定系數(shù)r2=0.9993,各點偏差在10%以內(nèi)。
 
多肽核酸藥物分析方法開發(fā)

注意事項分享
 
色譜方法開發(fā)注意事項:
多肽及核酸為兩性物質(zhì),極性比較大,保留相對較弱,且很容易在色譜柱殘留(用含有0.4-1%甲酸的常規(guī)洗針液洗針);多肽及核酸的分子量比較大,因此常規(guī)用于小分子的色譜柱(孔徑120Å ) 并不適合多肽分析,需要用300Å;多肽在新的色譜柱上很容易發(fā)生吸附現(xiàn)象,導(dǎo)致峰形差,需要對色譜柱進行鈍化處理(包括在流動相中加萬分之一的血漿或者白蛋白)。
 
前處理注意事項:
無法像小分子,找到一種合適的前處理方法。蛋白沉淀法幾乎使得目標肽一起沉淀,特別是分子量較大時(大于一萬的將不適合蛋白沉淀的前處理);液液萃取可能無法提取出目標肽或核酸(需要用SPE或者超濾等方式)。
 
多肽及核酸藥物容易發(fā)生非特異性吸附:
蛋白沉淀上清液,N2揮干造成多肽的損失;多肽及核酸標曲配制過程中的非特異性吸附(選擇合適的槍頭及容器)。
 
質(zhì)譜SRM采集方法開發(fā)注意事項:
大多數(shù)多肽及核酸很難找到特征性的碎片離子,低能量下,沒有碎片離子生成,而高能量下又生成很多小的碎片離子;此時可以運用SRM的母離子進行定量或者SIM模式下抽提高響應(yīng)電荷態(tài)離子流來進行定量。此時也同樣具備高的專屬性;多肽及核酸在進行碎裂時,往往會產(chǎn)生很多響應(yīng)很高但特異性不好的亞銨離子,這些離子會干擾SRM抽提離子通道的選擇,盡量不選擇低于200以下的,這些離子的通道的特異性差會有較高的背景干擾。
 
來源:賽默飛世爾科技(色譜與質(zhì)譜)
聯(lián)系電話:400 611 9236
E-mail:yang.chen4@thermofisher.com

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