Myra迷你自動化工作站在激酶檢測的應(yīng)用

對激酶活性進(jìn)行準(zhǔn)確的檢測依賴于精準(zhǔn)地加入特定濃度、體積和次數(shù)的試劑、底物和抑制劑。Myra迷你自動化工作站能夠提供無可比擬的分液精度，減少人工干預(yù)，實現(xiàn)人為誤差最小化，從而徹底變革激酶分析的操作。

Myra的主要特點 

Myra可通過編程來處理復(fù)雜的常規(guī)分液操作，包括通過倍比稀釋制備底物或抑制劑的濃度梯度，這對于動力學(xué)分析和抑制劑表征分析至關(guān)重要。高精度地對低至2ul體積的液體快速執(zhí)行這些常規(guī)操作的能力直接影響采集獲得的數(shù)據(jù)的質(zhì)量和可靠性。

Myra可運行的激酶檢測類型

• ADP-Glo 激酶檢測（ADP-Glo Kinase Assay）， 測量由激酶反應(yīng)隨時間而產(chǎn)生的腺苷二磷酸（adenosine diphosphate，ADP）的化學(xué)發(fā)光檢測方法 

• 時間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移（Time-Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer，TR-FRET），是靈敏可靠的熒光檢測技術(shù)，結(jié)合了時間分辨熒光和熒光共振能量轉(zhuǎn)移的原理，能使背景信號最小化，同時最大化信噪比。

Myra用于激酶檢測的優(yōu)勢

Myra 可 確保反應(yīng)條件被高度一致地復(fù)制，從而促進(jìn)生成米氏分析（Michaelis-Menten analysis）所必須的數(shù)據(jù)。這種一致性可以在不同的底物濃度條件下精準(zhǔn)確定反應(yīng)速度，這對于繪制Michaelis-Menten 曲線及計算動力學(xué)參數(shù)至關(guān)重要。

Myra可以快速穩(wěn)定地檢測一系列濃度范圍的大量化合物，從而高通量篩選激酶抑制劑。這一能力在藥物發(fā)現(xiàn)的早期非常寶貴，因為篩選的效率能夠顯著影響潛在的候選藥物確認(rèn)的速度。

小結(jié) 

Myra的先進(jìn)性和高性能使其成為激酶檢測方案和動力學(xué)分析必不可少的儀器。通過Myra能夠?qū)�激酶抑制劑進(jìn)行更準(zhǔn)確、更高效和更高通量的篩選，在促進(jìn)藥物開發(fā)中的作用怎么強(qiáng)調(diào)都不為過。對于這一領(lǐng)域的研究者來說，采用Myra代表著對實驗工作流程的質(zhì)量和效率的戰(zhàn)略性投資。

應(yīng)用示例：Promega ADP-Glo Kinase.

ADP-Glo Kinase 時間進(jìn)程實驗用來確定以多肽作底物的激酶的動力學(xué)

Myra激酶檢測方案

典型的 ADP-Glo™ 激酶檢測流程始于激酶反應(yīng)，在ATP存在的條件下，激酶使底物磷酸化。隨后加入 ADP Glo™ 試劑終止激酶反應(yīng)并消耗剩余的ATP，準(zhǔn)備用于ADP檢測的體系。最后，激酶檢測試劑將ADP轉(zhuǎn)化回ATP，后者通過化學(xué)發(fā)光信號進(jìn)行定量。采用Myra實現(xiàn)流程自動化，能夠保證每一個步驟都精確地計時并執(zhí)行，從而確保多個板和孔之間的分析完整性和一致性。 

實驗方案 

ADP-Glo 激酶分析：多肽按1:2 稀釋，總體積2 uL。將多肽在384孔板上稀釋，隨后加入2 uL 激酶。5分鐘后加入4ul終止液。系統(tǒng)性加入反應(yīng)組分需要考慮特定的所需時間，以保證精確地加入終止液。標(biāo)準(zhǔn)品為三個重復(fù)。繪制ADP標(biāo)準(zhǔn)曲線以計算ATP至ADP的轉(zhuǎn)化。 

ADP標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于確定酶底物的轉(zhuǎn)化

底物濃度曲線：對ADP的量作圖，生成每個時間段的反應(yīng)曲線。.

確認(rèn)每個酶稀釋度在每個時間點的反應(yīng)速度，并繪制Michaelis-Menten 曲線
 

Michaelis-Menten方程通過將反應(yīng)速度與酶和底物濃度相關(guān)聯(lián)來描述酶反應(yīng)的速度。從這些分析得到的準(zhǔn)確的動力學(xué)參數(shù)（Vmax and Km）對準(zhǔn)確闡明激酶活性和抑制劑效率至關(guān)重要。

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