數(shù)字PCR在定量MSC-ex中miR-27b-3助力肝纖維化研究的應(yīng)用

導(dǎo)讀

肝纖維化是全球范圍內(nèi)導(dǎo)致慢性肝病和肝硬化的主要病因，每年導(dǎo)致數(shù)百萬人死亡。其病理特征為肝臟中過度的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）沉積和膠原交聯(lián)，最終可能發(fā)展為不可逆的肝硬化或肝癌。盡管多年來研究人員在肝纖維化的分子機(jī)制上取得了諸多進(jìn)展，但由于病理復(fù)雜、分子標(biāo)記物難以精確檢測(cè)，當(dāng)前的治療手段仍然有限，缺乏有效的非侵入性診斷工具成為了肝纖維化早期檢測(cè)的難點(diǎn)之一。
江蘇大學(xué)附屬無錫市人民醫(yī)院的研究人員在Journal of Nanobiotechnology發(fā)表了題為《Mesenchymal stem cell-derived exosomal miR-27b-3p alleviates liver fibrosis via downregulating YAP/LOXL2 pathway》的文章。

作者采用naica微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)定量分析間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）衍生的外泌體（MSC-ex）中所攜帶的miR-27b-3p。這項(xiàng)技術(shù)通過其高度敏感的分子檢測(cè)能力，成功揭示了miR-27b-3p在外泌體中的富集情況，并通過抑制YAP/LOXL2通路，抑制膠原蛋白的沉積，減緩肝纖維化進(jìn)程。

 應(yīng)用亮點(diǎn)：

 首次提出通過MSC-ex中的miR-27b-3p調(diào)控YAP/LOXL2信號(hào)通路來緩解肝纖維化，展示了MSC-ex在抗纖維化治療中的潛力。

 使用naica微滴芯片數(shù)字PCR系統(tǒng)精準(zhǔn)定量MSC-ex中的miRNA，為外泌體中的微量miRNA功能研究提供了定量分析手段。

 首次證明miR-27b-3p通過抑制YAP轉(zhuǎn)錄因子下調(diào)LOXL2的表達(dá)，揭示了MSC-ex抗纖維化作用的背后機(jī)制，為治療肝纖維化提供了新思路。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

研究人員旨在通過數(shù)字PCR（dPCR）技術(shù)確定MSC-ex中miR-27b-3p的含量。因?yàn)閙iR-27b-3p在抑制肝纖維化中可能起到了關(guān)鍵作用，特別是通過靶向YAP蛋白的3'非翻譯區(qū)（3'UTR）抑制YAP蛋白的表達(dá)。

作者從MSC-ex中提取了125 ng的RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，每個(gè)dPCR反應(yīng)使用500 ng的cDNA。dPCR結(jié)果顯示MSC-ex中的miR-27b-3p數(shù)量為742 copies/104 particles。這個(gè)定量結(jié)果對(duì)于理解miR-27b-3p在外泌體中的分布和潛在的生物學(xué)功能至關(guān)重要。

* 圖 A展示了使用dPCR技術(shù)檢測(cè)MSC-ex中miR-27b-3p的熒光強(qiáng)度。
圖 B展示了dPCR檢測(cè)的每104個(gè)MSC-ex particles中miR-27b-3p的拷貝數(shù)。
 

通過了解MSC-ex中miR-27b-3p的精確數(shù)量，研究人員可以更好地評(píng)估這些外泌體在治療肝纖維化中的潛力。例如，他們可以評(píng)估需要多少外泌體來達(dá)到治療效果，以及這些外泌體如何在體內(nèi)分布和作用。
 

結(jié)論：

該研究利用數(shù)字PCR對(duì)MSC-ex攜帶的miR-27b-3p進(jìn)行定量分析，結(jié)果顯示其在MSC-ex中具有顯著富集。這一microRNA通過調(diào)控YAP/LOXL2信號(hào)通路，有效降低了肝纖維化進(jìn)程中的膠原沉積和肝細(xì)胞損傷。實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步證明，數(shù)字PCR 憑借其高度敏感和絕對(duì)定量的優(yōu)勢(shì)，為肝纖維化的早期診斷和病理研究提供了全新思路，并有望成為推動(dòng)抗纖維化治療策略優(yōu)化的重要工具。