自動液體分裝儀應(yīng)用案例：生活飲用水總大腸菌群檢測

根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn),生活飲用水中不應(yīng)含有病原微生物； 生活飲用水應(yīng)對微生物的幾個指標(biāo)總大腸菌群、大腸埃希氏菌、菌落總數(shù)。其中菌落總數(shù)不能超過100個ＣＦＵ／ｍＬ），總大腸菌群限值為不應(yīng)檢出。本方案利用多管發(fā)酵法，快速分裝乳糖蛋白胨培養(yǎng)液達(dá)到檢測出生活飲用水中的總大腸菌群數(shù)量。
 
方案詳情：

• 實驗原理

經(jīng)36℃±1℃培養(yǎng)24H，發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、經(jīng)證實試驗和革蘭氏染色檢測水中總大腸菌群的方法。
二、實驗準(zhǔn)備
1、培養(yǎng)基和試劑
① 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液
② 二倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液
③ 伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基
④ 革蘭氏染色液
2、儀器與設(shè)備
① 培養(yǎng)箱：36℃±1℃
② 冰箱
③ 電子天平
④ 顯微鏡
⑤ 平皿：直徑9CM
⑥ 試管
⑦ 無菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）FDT-SP01001
⑧ 無菌吸管：10 mL（具0.1 mL刻度）FDT-SP01010
⑨ 手動移液器：fluidot  1 mL  MSP1K
⑩ 電動移液器：fluidot   5 mL  FDT-1-1-5000
⑪錐形瓶
⑫小倒管
⑬載玻片
⑭吸頭：1.5mL   FDT-1500-1-TSF
⑮滅菌平皿：fluidot  FDT-9CM-2-S，直徑90 mm。
⑯自動液體分裝儀：fluidot  30001-PP
 
三、實驗步驟
1、乳糖發(fā)酵實驗
 
① 用無菌吸管或移波器吸取10mL水樣接種到10mL雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中,取1ml 水樣接種到10ml,單料乳糖蛋白陳培養(yǎng)液中,另取1ml,水樣注人到9m
② 檢驗水源水時,如污染較嚴(yán)重,應(yīng)加大稀釋度,可接種1mL、0.1mL、0.01 ml,甚至 0.1 mL、0.01mL、0.001mL,每個稀釋度接種5管單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液,每個水樣共接種15管。接種1mL以下水樣時,應(yīng)作 10倍遞增稀釋后,取1ml,接種,每遞增稀釋一次,換用1支1 mL,無菌吸管。
③ 將接種管置于36℃士1℃培養(yǎng)箱內(nèi),培養(yǎng)24h士2h,如所有乳糖蛋白胨培養(yǎng)管都不產(chǎn)氣產(chǎn)酸,則可報告為總大腸菌群未檢出,如有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者,則按下列步驟進(jìn)行。
 
 
 
2、分離培養(yǎng)
將產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上,于36℃士1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18h~24h，觀察菌落形態(tài),挑取符合下列特征的菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢:
----深紫黑色、具有金屬光澤的菌落;
----紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落;
----淡紫紅色、中心較深的菌落

1. 證實試驗

經(jīng)上述染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌,同時接種乳糖蛋白陳培養(yǎng)液,置36℃士1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h士2h,有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者,即證實有總大腸菌群存在。

• 實驗數(shù)據(jù)處理

根據(jù)證實為總大腸菌群陽性的管數(shù),查MPN表(見表3和表4),報告每100ml 水樣中的總大腸菌群 MPN值。稀釋樣品查表后所得結(jié)果應(yīng)乘稀釋倍數(shù)。如所有乳糖發(fā)酵管均為陰性時,可報告總大腸菌群未檢出。