表達(dá)譜芯片的介紹與應(yīng)用

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基因表達(dá)譜芯片的原理a1

簡單地說就是在一塊有多聚賴氨酸包被的硅片上或其它固相支持物（如玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纖維素膜、尼龍膜等，但需經(jīng)特殊處理：作原位合成的支持物在聚合反應(yīng)前要先使其表面衍生出羥基或氨基——視所要固定的分子為核酸或寡肽而定，并與保護(hù)基建立共價(jià)連接；作點(diǎn)樣用的支持物為使其表面帶上正電荷以吸附帶負(fù)電荷的探針分子，通常需包被以氨基硅烷或多聚賴氨酸等）將生物分子探針（Oligo或cDNA）以大規(guī)模陣列的形式排布，形成可與帶有標(biāo)記的目的分子（如熒光染料Cy3、Cy5標(biāo)記的cDNA）相互作用、交行反應(yīng)的固相表面，在激光的順序激發(fā)下標(biāo)記熒光根據(jù)實(shí)際反應(yīng)情況分別呈現(xiàn)不同的熒光發(fā)射譜征，電壓耦合元件相機(jī)或激光共聚焦顯微鏡根據(jù)其波長及波幅特征收集信號，作出比較和檢測，從而迅速得出所要的信息。 

雙色熒光標(biāo)記a2
cDNA基因表達(dá)譜分析常使用的雙色熒光標(biāo)記是利用競爭性雜交的原理，將對照組及測試組樣品的總RNA或mRNA 分別以不同的兩種熒光染料（如Cy5和Cy3）進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄標(biāo)記，然后將標(biāo)記產(chǎn)物等量混勻，與固定在玻片上的探針cDNA分子進(jìn)行競爭性雜交。檢測并計(jì)算兩種熒光強(qiáng)度的比值，可以得出兩組樣品間的基因表達(dá)差異。