細(xì)胞常見問題解答

1.原代細(xì)胞與細(xì)胞系有什么區(qū)別？

細(xì)胞培養(yǎng)物來源于原代外植體或分散的細(xì)胞懸液。通常在這樣的培養(yǎng)物中細(xì)胞增殖形成匯合地單層細(xì)胞或密集地細(xì)胞懸液。根據(jù)傳統(tǒng)定義，第一次收獲和接種的細(xì)胞被稱為原代細(xì)胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 這類細(xì)胞生命周期有限，在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細(xì)胞最大的生長空間，以保持細(xì)胞群中基因型和表型的一致性。

細(xì)胞系是不斷生長，分化的細(xì)胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細(xì)胞系用于醫(yī)療或科研。實(shí)際上，連續(xù)細(xì)胞系可以用大量次培養(yǎng)基培養(yǎng)，隨著代數(shù)的增加細(xì)胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。

需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細(xì)胞系這個(gè)詞表示細(xì)胞群除非細(xì)胞經(jīng)過了遺傳改造。

2.倍增和代數(shù)有什么區(qū)別？

      倍增是培養(yǎng)物中細(xì)胞總數(shù)加倍，通常是指細(xì)胞指數(shù)或?qū)��?shù)生長期。代數(shù)是指細(xì)胞群從培養(yǎng)瓶中移出，傳代培養(yǎng)過程的次數(shù)，傳代培養(yǎng)的目的是使細(xì)胞處于低密度以刺激其進(jìn)一步生長。

3.接收到的凍存細(xì)胞該如何處理？

收到包裝箱后，立即將凍存細(xì)胞從干冰移入液氮中凍存。此過程盡量快以避免升溫。不要將細(xì)胞儲存在-80℃，這樣會對細(xì)胞造成不可挽回的傷害。

4.有多少經(jīng)驗(yàn)才能開始正常人類細(xì)胞培養(yǎng)？

      推薦有經(jīng)驗(yàn)者在無菌環(huán)境下用層流凈化罩工作，如果有經(jīng)驗(yàn)的話對其它細(xì)胞類型也是很有利的。如果你是細(xì)胞培養(yǎng)的初學(xué)者或打算建立細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室，我們會為你提供幫助。請聯(lián)系我們的細(xì)胞培養(yǎng)專家。

5.凍存的細(xì)胞該如何開始培養(yǎng)？

  ⑴將一管細(xì)胞從液氮罐中取出，注意保護(hù)手和眼睛。

  ⑵用10秒鐘時(shí)間將小管的蓋子擰松1/4以去除殘留在螺紋處的液氮，然后將蓋子蓋緊。

  ⑶將小管放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體完全融化。

  ⑷將小管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。

  ⑸用70％的酒精沖洗小管，然后擦去多余酒精。

  ⑹打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋。用1ml離心管離心內(nèi)容物。

  ⑺平衡管內(nèi)物，用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶(多數(shù)細(xì)胞用T-75的培養(yǎng)瓶)。多數(shù)細(xì)胞類型推薦接種密度為每平方厘米5000細(xì)胞。

  ⑻蓋好蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細(xì)胞分布均勻。若需要?dú)怏w交換可打開蓋子。

  ⑼將培養(yǎng)瓶放放培養(yǎng)箱中(37℃,5%CO2,95%空氣)

  ⑽植入培養(yǎng)后第6-16小時(shí)更換一次培養(yǎng)基以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細(xì)胞。

6.當(dāng)我第一次植入正常人類細(xì)胞時(shí)需要旋轉(zhuǎn)細(xì)胞去除二甲基亞楓嗎？

      第一次植入正常凍存細(xì)胞時(shí)，我們不推薦旋轉(zhuǎn)去除二甲基亞楓。離心過程比殘留二甲基亞楓對細(xì)胞的傷害更大，尤其是不正當(dāng)?shù)母咚傩�轉(zhuǎn)。我們的經(jīng)驗(yàn)是如果二甲基亞楓的濃度很低，細(xì)胞不會受毒害。如果你將1ml細(xì)胞植入已加入15ml培養(yǎng)基的T-75培養(yǎng)瓶中，二甲基亞楓的濃度將小于0.67％，沒有發(fā)現(xiàn)負(fù)面影響。實(shí)際上，如果細(xì)胞的接種密度為每平方厘米5000-10000，二甲基亞楓的濃度很低。

7.多久更換一次培養(yǎng)基？

      一般2-3天更換一次培養(yǎng)基，這取決于細(xì)胞生長的速度。許多細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室通常在周一，周三，周五更換培養(yǎng)基。

      注意：第一次植入凍存的細(xì)胞后，在6-16小時(shí)內(nèi)更換培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡細(xì)胞。

8.我能擴(kuò)培和再冰凍ScienCell的正常人類細(xì)胞嗎？

      這取決于細(xì)胞類型。一些細(xì)胞類型像神經(jīng)細(xì)胞，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和一些生長緩慢的上皮細(xì)胞不推薦擴(kuò)培和再冰凍。其它的細(xì)胞類型像成纖維細(xì)胞、星形細(xì)胞、腎系膜細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞等等可以擴(kuò)培和再冰凍。然而，需要注意的是再冰凍的過程可能導(dǎo)致細(xì)胞生長性能的改變。如果你想要再冰凍細(xì)胞，請親自咨詢我們的技術(shù)支持并使用ScienCell SF-CFM，和特定的無血清培養(yǎng)基，以獲得最好的效果。

9.我能長時(shí)間凍存ScienCell的培養(yǎng)基嗎？

     不推薦凍存培養(yǎng)基，冰凍高營養(yǎng)的培養(yǎng)基將導(dǎo)致培養(yǎng)基成分不可逆降解。

10.培養(yǎng)瓶中應(yīng)該加入多少體積的培養(yǎng)基？

     推薦用量：T-25培養(yǎng)瓶5ml,T-75培養(yǎng)瓶15ml,T-150培養(yǎng)瓶30ml。

11.使用你們的專業(yè)培養(yǎng)基，還需要另外的補(bǔ)充物嗎？

      ScienCell 公司的培養(yǎng)基是為每一類細(xì)胞特定研制的。加入相關(guān)的培養(yǎng)成分(生長因子，抗生素和胎牛血清)到基本培養(yǎng)液中，你就得到了完全培養(yǎng)基。其它的不再需要。

12.完全培養(yǎng)基的保質(zhì)期是多久？

       加入所有的補(bǔ)充物后，培養(yǎng)液就成了完全培養(yǎng)基。如果完全培養(yǎng)基儲存在4℃條件下，并且每次使用時(shí)置于常溫的時(shí)間盡量少，完全培養(yǎng)基的保質(zhì)期為6周。

13.可以使用自己的或其它公司的培養(yǎng)基培養(yǎng)ScienCell的正常人類細(xì)胞嗎？

       ScienCell公司的正常人類細(xì)胞使用我們的完全培養(yǎng)基培養(yǎng)并通過測試，細(xì)胞已適應(yīng)此完全培養(yǎng)基。使用其它的培養(yǎng)基，由于需要適應(yīng)過程可能會導(dǎo)致細(xì)胞不良生長。我們推薦使用我們特定的培養(yǎng)基培養(yǎng)正常人類細(xì)胞。

14.正常人類細(xì)胞能傳多少代？

       ScienCell不使用代數(shù)描述細(xì)胞的生長潛能，因?yàn)槊恳晃豢蛻粲貌煌�的分流比。ScienCell研究室保證在培養(yǎng)過程中使用我們的培養(yǎng)基和試劑，正常人類細(xì)胞達(dá)到15倍增倍增(除了在說明書中已指明的)。

15.正常人類細(xì)胞推薦的分流比是多少？

       ScienCell 公司不推薦對正常人類細(xì)胞使用分流比，因?yàn)樵谟靡让柑幚砗蠹?xì)胞的產(chǎn)量會有所變化。我們推薦在胰酶作用后對細(xì)胞計(jì)數(shù)，接種密度為5000-10000細(xì)胞每平方厘米(在細(xì)胞說明書中有推薦接種密度)。

16. 可以使正常人類細(xì)胞處于實(shí)驗(yàn)性饑餓嗎？

        可以將ScienCell 公司的正常人類細(xì)胞處于實(shí)驗(yàn)性饑餓。細(xì)胞在沒有添加物的基本培養(yǎng)基中可以維持一段時(shí)間，但細(xì)胞必須處于良好的環(huán)境中。過了這段時(shí)期，實(shí)驗(yàn)應(yīng)終止，因?yàn)闀r(shí)間過長將導(dǎo)致細(xì)胞死亡。最好在實(shí)驗(yàn)前測試一下細(xì)胞在饑餓條件下能存活多長時(shí)間，這取決于多種因素。

17. 可以用質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染正常人類細(xì)胞嗎？

        當(dāng)然，我們已成功轉(zhuǎn)染了多種細(xì)胞，比如皮膚成纖維細(xì)胞，肺成纖維細(xì)胞，皮膚微血管內(nèi)皮細(xì)胞等等。