Flag標簽抗體在免疫沉淀IP&免疫熒光IF中的應用

Flag標簽系統(tǒng)是已被公認的用于表達、純化以及檢測融合蛋白的表達系統(tǒng)，廣泛應用于Western blotting、免疫細胞組化、免疫共沉淀、流式細胞術、蛋白純化以及蛋白相互作用、蛋白分離等多個研究領域。Flag標簽是一個與重組蛋白相融合的由 8個親水氨基酸（DYKDDDDK）組成的多肽片斷。Flag標簽只有8個氨基酸組成，因此它不會占據其他表位與結合域，避免導致融合蛋白的功能、分泌性以及轉運發(fā)生改變。由于它的親水性特點，F(xiàn)lag標簽傾向于定位在融合蛋白表面，因此更易與抗體結合以及被腸激酶酶解。

如何選擇合適的Flag標簽抗體？

我們在選擇Flag抗體時，主要根據自己的需要，特別是實驗應用上的需要。另外，一個抗體檢測后的應用類型越多，在使用過程中的選擇余地就越大；而小鼠源的單克隆抗體一般在特異性、穩(wěn)定性以及效價都要優(yōu)于多克隆抗體。 另外，抗體的效價也是考察該抗體性價比的重要方面，也即相當于實際應用時的稀釋比率。一個效價高的100μl Flag抗體（假如其WB檢測的稀釋比率是1:5000，最終使用液相當于500ml），要比效價低的1ml的Flag抗體（假如WB檢測的稀釋比率是 1:200，最終使用液相當于2ml）性價比更高。

Abbkine的Flag標簽抗體的效價有點超出意料。做WB實驗時，第一次按照說明書推薦的1:1000，顯示的條帶很強，后來不斷的稀釋摸索條件，1:10000稀釋的時候做WB條帶仍然是很不錯的。 ——中山大學醫(yī)學部一客戶

為什么推薦Abbkine品牌的Flag抗體？

Flag系統(tǒng)是Sigma-Aldrich^®擁有的系統(tǒng)，因此Sigma的Flag標簽抗體是之前諸多客戶的選擇。Sigma的Flag標簽抗體主要有M1和M2兩種克隆號的抗體，其中M1克隆號的Flag抗體可用于檢測Flag標簽位于N末端的重組蛋白，而M2克隆號的Flag單克隆抗體則可以檢測幾乎所有的Flag標簽蛋白。其2010年的中國報價分別為￥4649/200μg和￥3683/200μg。

假如您想選擇一款性價比更高的Flag標簽抗體，那Abbkine可能是另一個優(yōu)先選擇，其價格比Sigma要低30%左右。Abbkine的Flag標簽抗體 Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody（貨號#A02010）可以用于檢測和Flag標簽融合表達蛋白的表達、細胞內定位，以及純化、定性或定量檢測Flag融合表達蛋白（包括N末端、C末端）等。該Flag抗體為小鼠源單克隆抗體，其免疫原為KLH偶聯(lián)的Flag標簽（DYKDDDDK）多肽。另外，Abbkine還同時提供經HRP偶聯(lián)的Flag標簽抗體，尤其適合IP-WB驗證時去除二抗的干擾；兔源多克隆Flag抗體也為客戶提供另一種Flag標簽的檢測方案。

Abbkine的Flag單克隆標簽抗體不僅能應用于細胞內定位的IF實驗，同樣還能應用于IP實驗。1:200甚至更高的IP實驗稀釋比率，也說明了該抗體本身的具有很高的效價，同時，因為是單克隆抗體，因此特異性也很高。高效價所對應的高稀釋比率也意味著高性價比。對于WB實驗，其說明書的推薦起始稀釋比例是1:1000，但在在1:5,000的稀釋比率下也表現(xiàn)優(yōu)異（Abbkine也進行了10,000次以后的稀釋，仍然顯示出很好的條帶顯示，沒有在說明書里列出）。下圖為Abbkine的Flag抗體的應用圖示。

點擊圖片查看Flag標簽抗體更詳細信息

一個高效價的抗體不僅影響實驗結果的靈敏度，還意味著更高的性價比。Abbkine的Flag標簽抗體（貨號#A02010）在常規(guī)的WB實驗里， 推薦的起始稀釋比率為1:1000，實際在Abbkine的應用中，還有1:10,000甚至更高的稀釋比率，需要根據客戶具體的實驗條件進行進行優(yōu)化。

Abbkine還提供大包裝1ml的Flag標簽抗體，非常適合經常進行His標簽系統(tǒng)免疫學檢測的實驗需求。為方便客戶的使用， 上述產品，Abbkine均在中國備有現(xiàn)貨。Abbkine針對中國市場，提供全球化的產品質量追蹤和售后服務以及保障，如果您在使用過程中有任何問題， 請直接與其當地代理商艾美捷科技有限公司聯(lián)系。