鈣離子熒光染料應(yīng)用詳解

鈣離子熒光染料產(chǎn)品描述

鈣離子熒光探針FLUO-3AM應(yīng)用詳解
一、Fluo-3AM的理化性質(zhì)
顏色及形狀：橘紅色液體
純度：，大于95%（高效液相）
溶解性：溶于DMSO
吸收波長(zhǎng)/發(fā)射波長(zhǎng)：506nm /526nm(低/高鈣) 
消散系數(shù)：86000/Mcm(506nm)
保存與使用：粉狀的FLUO-3AM應(yīng)保存于-20度以上。建議使用DMSO作為溶媒。在溶解前，F(xiàn)LUO-3AM和DMSO均須放置至室溫。溶解過(guò)程可能會(huì)比較慢。用無(wú)水的DMSO溶解的FLUO-3AM長(zhǎng)期保存，應(yīng)嚴(yán)格密封，并保存于-20度。使用前，將保存液放置至室溫后再打開�？杀苊釧M探針在長(zhǎng)期的保存過(guò)程中水解。
二、Fluo-3AM的工作原理
      FLUO-3廣泛用于長(zhǎng)波長(zhǎng)的熒光鈣指示劑。其在506NM處被吸收，可以被氬離子激光的488nm激發(fā)光激發(fā)，便于檢測(cè)。FLUO-3在沒(méi)有同鈣結(jié)合的情況下，無(wú)熒光產(chǎn)生。但是，在與鈣結(jié)合后，熒光（526nm）增強(qiáng)至少40倍。Fluo-3 AM是一種可以穿透細(xì)胞膜的熒光染料。Fluo-3 AM的熒光非常弱，其熒光不會(huì)隨鈣離子濃度升高而增強(qiáng)。Fluo-3 AM進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3，從而被滯留在細(xì)胞內(nèi)。Fluo-3可以和鈣離子結(jié)合，結(jié)合鈣離子后可以產(chǎn)生較強(qiáng)的熒光，最大激發(fā)波長(zhǎng)為506nm，最大發(fā)射波長(zhǎng)為526nm。實(shí)際檢測(cè)時(shí)推薦使用的激發(fā)波長(zhǎng)為488nm左右，發(fā)射波長(zhǎng)為525-530nm。
三、Fluo-3AM的應(yīng)用
1、過(guò)程概述
用于細(xì)胞內(nèi)鈣離子檢測(cè)時(shí)，F(xiàn)luo-3 AM的常用濃度為5μM。通常用含有5μM的Fluo-3 AM的適當(dāng)溶液和細(xì)胞一起在37℃孵育30-60分鐘進(jìn)行熒光探針裝載，隨后適當(dāng)洗滌，洗滌后可以考慮適當(dāng)再孵育20-30分鐘以確保Fluo-3 AM在細(xì)胞內(nèi)完全轉(zhuǎn)變成Fluo-3。然后在流式細(xì)胞儀上進(jìn)行檢測(cè)。
2、Fluo-3AM使用液的配置
100ug的Fluo-3AM，分子量是1219.9。按實(shí)際需要的摩爾濃度折算，無(wú)水DMSO溶解。一般配置成1~5mM的DMSO儲(chǔ)存液。如出現(xiàn)難溶現(xiàn)象，可以用20%的F127的DMSO溶液助溶。
四、注意事項(xiàng)：
1、熒光染料有淬滅問(wèn)題，應(yīng)盡量避光保存；
2、實(shí)驗(yàn)時(shí)注意個(gè)人防護(hù)，戴手套、口罩；