基于一種新型流式細(xì)胞儀來(lái)測(cè)量微小顆粒的測(cè)量校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)

W. L. CHANDLER, W. YEUNG, J. F. TAIT

 

 

背景：在流式細(xì)胞儀上利用聚苯乙烯微球來(lái)校準(zhǔn)微粒直徑的測(cè)量方法。聚苯乙烯微球比與其大小相近的細(xì)胞微粒具有更強(qiáng)的光散射能力。

方法：我們利用聚苯乙烯微球和二氧化硅微球與人造的脂質(zhì)囊泡和血小板相對(duì)比，檢測(cè)它們?cè)贚SRII, FC500 and Apogee A40上不同的前向角度光散射強(qiáng)度。然后，對(duì)比不同校準(zhǔn)方法計(jì)數(shù)血漿中微粒的數(shù)目。

結(jié)果：在488nm波長(zhǎng)情況下，有更高折射率的聚苯乙烯微球和二氧化硅微球相對(duì)脂質(zhì)囊泡或血小板具有更強(qiáng)的光散射強(qiáng)度。對(duì)于直徑小于0.5μm的聚苯乙烯微球，LSRII 和FC500無(wú)法計(jì)數(shù)，也不能利用大小將其分開(kāi)。在Apogee A40流式細(xì)胞儀上，直徑小至0.2 μm的聚苯乙烯微球也能夠被有效分離，直徑0.4μm的聚苯乙烯微球產(chǎn)生的光散射強(qiáng)度與直徑1μm脂質(zhì)體或細(xì)胞微粒的光散射強(qiáng)度相同。利用Apogee A40這種新的校準(zhǔn)器，在血漿樣本中總共發(fā)現(xiàn)了80 000–4 000 000/ μL微粒，11 000–350 000 /μL膜聯(lián)蛋白微粒和6000–350 000/ μL血小板微粒。

結(jié)論：Apogee A40流式細(xì)胞儀能夠分辨小至直徑0.2 μm的聚苯乙烯微球、直徑0.4 μm的微粒。在Apogee A40上，直徑0.4μm的聚苯乙烯微球與1μm的細(xì)胞微粒有相同的正向散射強(qiáng)度，可以作為計(jì)量基準(zhǔn)。利用此標(biāo)準(zhǔn)Apogee A40可以比Megamix Gate的方法檢測(cè)出更多數(shù)量的微粒。

 

發(fā)表于Journal of Thrombosis and Haemostasis，6 JUN 2011，

作者：W. L. CHANDLER, W. YEUNG, J. F. TAIT，Department of Laboratory Medicine, University of Washington, Seattle, WA, USA.