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MF-10 Gradiflow系統(tǒng)——蛋白質(zhì)組學(xué)分析中進(jìn)行血漿初步分離的新方法

瀏覽次數(shù)：3119　發(fā)布日期：2011-10-10　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

低豐度蛋白，盡管稀少，卻常常帶有重要信息。在疾病治療方面，它們往往充當(dāng)了診斷、預(yù)后和治療效果的標(biāo)記物，也可能是治療的靶點(diǎn)。在蛋白質(zhì)組學(xué)分析方面，研究者也希望能獲得復(fù)雜樣品中低豐度蛋白，從中找到具有特殊作用的成員。然而，猶如大海撈針一般，它們卻并不好找。近年來，研究人員正不斷提出新的方法和技術(shù)，從生物樣品中挑出低豐度蛋白，以便確切地了解它們是什么，以及它們意味著什么。

    血漿的低豐度蛋白越來越成為科學(xué)研究的熱點(diǎn)，越來越多的證據(jù)也表明，血漿的很多低豐度蛋白是十分重要的疾病標(biāo)記物，其表達(dá)的異常，與疾病的發(fā)展密切。2-DE（雙向電泳）是分離不同分子量和PI值蛋白的有效方法，但由于大量的低豐度蛋白往往與高豐度的蛋白結(jié)合在一起，大體積復(fù)雜樣品的雙向電泳的效果并不理想。

    許多研究人在竭盡全力的在尋找更多的辦法得到這些低豐度的蛋白。但試想一下，這些低豐度的蛋白被高豐度蛋白結(jié)合或是掩蓋，工作的難度可想而知。澳大利亞MinomicAnna Fitzgerald決定利用MF-10 Gradiflow系統(tǒng) (現(xiàn)稱 ProteomeSep, 由澳大利亞NuSep公司所生產(chǎn))，來分離血漿中的蛋白，通過一步初步的分離，然后將樣品再通過2-DE分離，希望獲得較理想的分離結(jié)果。

        MF-10 Gradiflow系統(tǒng)可以通過不同的蛋白分子量和PI值將樣品中的區(qū)別，方便快捷的分離復(fù)雜樣品的蛋白。由于樣品在分離時(shí)，不需要變性處理，因此MF-10分離的樣品保存著原本的活性。

    通過分子量分離。分離柱的兩側(cè)是兩個(gè)5kDa的NMWCO膜，中間放置了1000, 500, 150, 65 and 45 kDa 的NMWCO膜，從而將柱分為6個(gè)槽室。在陰極點(diǎn)樣品，加一定電壓，不同大小范圍的蛋白將被分離在不同的槽室。

    通過蛋白PI值分離。將5個(gè)1000kDa的NMWCO膜放置在柱中間，將柱分為6個(gè)槽室。每個(gè)槽室點(diǎn)樣品，加電壓，樣品將按照PI值分開。

    Anna Fitzgerald利用MF-10分離血漿樣品，獲得比較理想的結(jié)果。而研究者所做的就是簡(jiǎn)單的兩步電泳。但大大降低了高豐度蛋白在樣品中的比重，使得分離難度大大降低。

    MF-10 Gradiflow系統(tǒng)很好的解決了復(fù)雜樣品中低豐度蛋白難以分離的問題，方便快捷的操作，不僅可以用于血漿中蛋白質(zhì)組學(xué)的研究，腦脊液、尿液等的分析中也有著廣泛的應(yīng)用。

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