獨(dú)特?zé)o標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)無需熒光染料標(biāo)記細(xì)胞也可對其進(jìn)行成像分析

 

基于細(xì)胞成像的分析技術(shù)一般需要使用熒光染料進(jìn)行標(biāo)記，一些熒光標(biāo)記可能對活細(xì)胞具有毒性或者只能用于固定過的細(xì)胞進(jìn)行染色。無標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)使得研究者既無需耗時(shí)耗力的染色流程也無需擔(dān)心染料對正常細(xì)胞活力的影響，就可以計(jì)算出細(xì)胞數(shù)目和細(xì)胞匯合度，第一時(shí)間獲得量化的細(xì)胞增殖及健康情況的數(shù)據(jù)。裝有MiniMax. 300細(xì)胞成像模塊的SpectraMax. i3多功能微孔板檢測平臺具有專利的StainFree.無標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)。該技術(shù)可應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性或其他分析，無需DAPI 標(biāo)記細(xì)胞核，DAPI作為活細(xì)胞染料可結(jié)合DNA，但長時(shí)間標(biāo)記會對細(xì)胞產(chǎn)生毒性。

 

本文將比較使用無標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)與使用傳統(tǒng)的熒光染料標(biāo)記細(xì)胞核和整個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)的區(qū)別。同樣展示出如何通過無標(biāo)記細(xì)胞分析技術(shù)來替代熒光染料標(biāo)記的方法來獲得化合物處理細(xì)胞后的IC₅₀曲線。

優(yōu)勢

1. 無需熒光染料標(biāo)記也可計(jì)算出細(xì)胞數(shù)目和細(xì)胞匯合度

2. 在不影響細(xì)胞正常生長情況下對其進(jìn)行監(jiān)測

3. SoftMax Pro軟件其直觀化的用戶操作界面使得成像設(shè)置更加簡便和快捷

 

將CHO細(xì)胞按照8000/孔至250/孔的密度鋪在384孔板中并培養(yǎng)過夜。第二天，使用SpectraMax MiniMax細(xì)胞成像系統(tǒng)的透射光(TL)通道進(jìn)行成像。為了更好的比較無標(biāo)記細(xì)胞計(jì)數(shù)和熒光標(biāo)記細(xì)胞計(jì)數(shù)兩種方法的效果，相同細(xì)胞被固定后用綠色全細(xì)胞染料或紅色核染料進(jìn)行染色，然后使用相應(yīng)的熒光通道(541nm和713nm)進(jìn)行成像。

 

無標(biāo)記分析技術(shù)使用的是透射光通道成像后對細(xì)胞數(shù)目進(jìn)行計(jì)算。SoftMax Pro軟件中，已預(yù)先設(shè)置針對許多不同類型細(xì)胞的分析模塊，只需輕點(diǎn)讀取按鍵即可獲得結(jié)果。操作者也可利用其儀器自學(xué)習(xí)的功能，即軟件的一種邏輯算法，教會軟件去識別細(xì)胞(如圖1)。可以對單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)或者對細(xì)胞的匯合度進(jìn)行分析，提供了一種快捷的方法可以隨時(shí)隨地監(jiān)測細(xì)胞的生長狀況而無需對其進(jìn)行染色。用戶也可根據(jù)需要選擇自定義設(shè)置，儀器具有的溫度控制功能可維持細(xì)胞成像過程在37°C的環(huán)境下，這樣可以避免長時(shí)間室溫環(huán)境下進(jìn)行細(xì)胞成像對細(xì)胞活力的影響。

 

 

 

 

通過 SoftMax Pro軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析后，我們發(fā)現(xiàn)紅色和綠色熒光通道細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果與無標(biāo)記方法獲得的細(xì)胞數(shù)目有著高度的一致性。軟件中預(yù)設(shè)核計(jì)數(shù)和全細(xì)胞計(jì)數(shù)分析模塊可加速其進(jìn)行分析。圖2顯示兩種方法計(jì)算出的細(xì)胞數(shù)目曲線幾乎重合。

 

 

 

將Hela細(xì)胞按5000/孔的密度鋪在384孔板中并培養(yǎng)過夜。第二天使用幾種可誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的化合物處理72小時(shí)，利用SpectraMax MiniMax細(xì)胞成像系統(tǒng)進(jìn)行分析。無標(biāo)記分析法計(jì)算處理后活細(xì)胞數(shù)量，并用Soft-Max Pro軟件繪制出其IC₅₀曲線。結(jié)果顯示細(xì)胞對化合物的反應(yīng)情況無需通過破壞性強(qiáng)的染色和脫色步驟也可被準(zhǔn)確的檢測到(圖3)。

 

 

 

 

無標(biāo)記分析技術(shù)作為一種可進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)和監(jiān)測細(xì)胞生長狀態(tài)的新方法，可大大節(jié)約了試驗(yàn)的時(shí)間和昂貴的染料。無需固定細(xì)胞和染色意味著生長中的活細(xì)胞也能在任何時(shí)間被分析檢測，并且不干擾細(xì)胞之后的正常生長，方便進(jìn)行后續(xù)分析檢測。

SoftMax Pro軟件具有簡便的成像分析操作界面，針對各種常見細(xì)胞類型提供了方便用戶的預(yù)設(shè)分析設(shè)模塊，同樣研究者也可按自己的需要進(jìn)行自定義設(shè)置。