ECL 化學(xué)發(fā)光法是目前最常用、最靈敏的 Western Blot 檢測(cè)方法。由于這些底物不會(huì)在膜表面沉淀、牢牢結(jié)合在膜上,因此可以通過(guò)一抗二抗去除液(Stripping buffer)將親和結(jié)合的一抗和二抗去除。一抗二抗去除液既要足夠強(qiáng)烈而有效解離結(jié)合的抗體,也要足夠溫和使轉(zhuǎn)移的目標(biāo)蛋白仍能完整地留在 NC 膜或 PVDF 膜上。通過(guò)使用一抗二抗去除液,充分去除一抗二抗,可以非常方便地重新利用使用過(guò)的膜檢測(cè)其它蛋白。和重新跑一次 SDS-PAGE 膠相比,不僅省時(shí)省力,而且可以消除重新上樣而帶來(lái)的誤差,使可比性更強(qiáng)。
一、 使用方法
1. 用本產(chǎn)品覆蓋經(jīng) ECL 發(fā)光的膜,室溫孵育 5 - 10 分鐘。
2. 棄去去除液,再加入新鮮的去除液覆蓋經(jīng)ECL發(fā)光的膜,室溫孵育5 - 10分鐘。
3. 棄去去除液,用 PBS 洗滌 10 分鐘兩次。
4. TBST洗滌5分鐘?捎糜诮酉聛(lái)的封閉、孵育。
二、注意事項(xiàng)
1. 如使用辣根過(guò)氧化物酶(HRP),封閉時(shí)應(yīng)當(dāng)使用脫脂奶粉或BSA,如使用堿性磷酸酯酶,封閉時(shí)應(yīng)當(dāng)使用酪蛋白。
2. 為取得最佳效果,推薦使用PVDF膜。但硝酸纖維素膜也可以使用本W(wǎng)estern一抗二抗去除液。
3. 本產(chǎn)品適用于使用ECL或類似的化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的Western Blot檢測(cè)。使用非化學(xué)發(fā)光試劑進(jìn)行的Western Blot檢測(cè),例如DAB、NBT/BCIP等,則不適用于本產(chǎn)品。
4. 本W(wǎng)estern一抗二抗去除液有輕微腐蝕性,使用時(shí)請(qǐng)注意防護(hù)。
5. 對(duì)于特定的抗原和抗體,很難說(shuō)哪一種Western Blot一抗二抗去除液的效果最好。在遇到一抗二抗去除效果欠佳時(shí),可以考慮適當(dāng)延長(zhǎng)一抗二抗去除液的孵育時(shí)間,同時(shí)確保孵育時(shí)的溫度不低于20℃。溫度過(guò)低時(shí)一抗二抗的去除效果會(huì)下降。同時(shí)也可以考慮嘗試其它的一抗二抗去除液,以摸索出最佳的適合您實(shí)驗(yàn)條件的Western Blot一抗二抗去除液。
6. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿戴實(shí)驗(yàn)防護(hù)服、手套、口罩等必要的防護(hù)裝備。
三、產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱 |
目錄號(hào) |
規(guī)格 |
目錄價(jià) |
Western Blot一抗二抗去除液(酸性) |
WB026 |
250ml |
180 |
Western Blot一抗二抗去除液(中性) |
WB0261 |
250ml |
250 |