PeproTech-ELISA試劑盒常見問題匯總

1. 的一個能檢測多少塊板？

一個標(biāo)準(zhǔn)ELISA試劑盒所含組分足夠檢測10塊96孔板，而一塊Mini ELISA試劑盒所含組分足夠檢測2塊96塊。

2. 中所含的HRP結(jié)合物的穩(wěn)定性如何？

ABTS ELISA試劑盒中的Avidin-HRP 在2-8℃最多穩(wěn)定一個月，分裝并凍存于-20℃以下則可最長穩(wěn)定2年，避免反復(fù)凍融。TMB ELISA試劑盒中的鏈霉親和素-HRP可以在2-8℃中穩(wěn)定半年。

3. 如何獲得試劑盒的交叉反應(yīng)信息？

PeproTech在實驗室內(nèi)自行測試了其ELISA試劑盒的交叉反應(yīng)性，可在說明書中查看測試結(jié)果。

4. 過程中如果想周末停一下怎么辦？

可以在周五用包被抗體包板，然后放4℃保存，下周一再繼續(xù)實驗，請注意：抗體包被時間的改變可能會引起板間結(jié)果的差異。

5. PeproTech的EDK是否適用于所有類型的樣本？

雖然PeproTech沒有用其試劑盒對每種樣本進(jìn)行測試，但這些試劑盒應(yīng)該適用于（但不僅限于）以下標(biāo)本：血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清、尿液和唾液。

6. 顯色反應(yīng)需要終止嗎？

Avidin-HRP和底物ABTS的顯色反應(yīng)是不需要終止的，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品的零孔OD值小于0.2，或最高濃度孔OD值小于1.2時，通常可以獲得可靠的標(biāo)準(zhǔn)曲線，如要終止顯色反應(yīng)，可以用1%SDS作為終止液。雖然資料顯示SDS是ABTS的最適終止液，但PeproTech并未在實驗室中使用終止液。

7. PeproTech的ABTS EDK可以用TMB作為底物嗎？

PeproTech的EDK是用ABTS進(jìn)行優(yōu)化的，因此最好使用ABTS作為底物，這些試劑盒也與TMB配合使用，但需要做一些調(diào)整：

 試劑盒中的Avidin-HRP不能與TMB配對，必須另購鏈霉親和素-HRP；

 鏈霉親和素-HRP的工作濃度需要優(yōu)化；

 使用鏈霉親和素-HRP和TMB時，通常需用終止液，請按照說明書操作；

 加終止液前，TMB的反應(yīng)時間需要優(yōu)化；

 使用推薦的酶標(biāo)板，并在450nm讀取吸光值，校正波長為650nm。

8. EDK組分中為什么要添加D-甘露醇？

在EDK組分中加入D-甘露糖的目的是使蛋白/抗體可見，這不會影響ELISA的檢測結(jié)果。

9. 是否可以將EDK說明書中的曲線作為我的標(biāo)準(zhǔn)曲線？

每塊ELISA板必須單獨做標(biāo)準(zhǔn)曲線，也就是說，一塊板的標(biāo)準(zhǔn)曲線不能用于另一塊板，PeproTech的EDK說明書中提供的標(biāo)曲是在自己的實驗室中做出來的，僅可用作示例。

10. PeproTech的標(biāo)準(zhǔn)曲線是如何生成的？

在實驗室中做ELISA時，PeproTech會用Molecular Devices公司的酶標(biāo)儀讀取吸光值，然后用SOFTmax PRO軟件進(jìn)行結(jié)果分析，該軟件能將獲取的數(shù)據(jù)進(jìn)行四參數(shù)曲線擬合。

具體的算法如下：