高通量測序(NGS)的結(jié)果可能是錯誤的！

基因檢測技術(shù)曾多次被評為全球顛覆性技術(shù)，但是其混亂的商業(yè)應(yīng)用也一直為業(yè)內(nèi)所詬病。隨著個體化醫(yī)療的發(fā)展和"精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)"概念的提出，基因檢測被越來越多地應(yīng)用于臨床腫瘤診斷與治療中。同時，隨著高通量測序技術(shù)的發(fā)展，基因檢測市場愈加火爆。在被稱為"無創(chuàng)產(chǎn)前基因檢測后的下一塊大蛋糕"的腫瘤診斷與治療市場，出現(xiàn)了各種各樣的基因檢測機(jī)構(gòu)，但測序質(zhì)量良莠齊、數(shù)據(jù)解讀差異甚大，常常出現(xiàn)錯誤的診斷結(jié)果，影響最終治療決策，造成嚴(yán)重醫(yī)療后果。有的是測序不準(zhǔn)確，有的是認(rèn)定的變異基因與特定的疾病沒有關(guān)系，有的是基因與特定疾病有關(guān)系但卻沒有辨別出來，這些都會造成誤診誤治。

準(zhǔn)確率的保障：標(biāo)準(zhǔn)品

基因診斷錯誤率居高不下，主要原因就是沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。這種統(tǒng)一行業(yè)規(guī)范的缺乏，導(dǎo)致了不同人員、實(shí)驗(yàn)室，乃至不同平臺檢測的結(jié)果無法比較。清晰、穩(wěn)定、統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)是規(guī)范行業(yè)的第一步。標(biāo)準(zhǔn)品的使用應(yīng)貫穿在基因檢測的整個過程中。通過與標(biāo)準(zhǔn)品比較，可以得到結(jié)果的包括：DNA提取是否成功，提取了多少DNA，是否有所尋找的變異，病人樣本中有多少變異，每個突變位點(diǎn)的頻率是多少等信息。　

標(biāo)準(zhǔn)品的使用在國外有著成熟的環(huán)境和經(jīng)驗(yàn)。以下Horizon Discovery公司對標(biāo)準(zhǔn)品的使用和分析可以一定程度上幫我們一窺究竟。

Horizon公司的核心技術(shù)為基因編輯。公司在該領(lǐng)域積累了超過十年的豐富經(jīng)驗(yàn)。公司已使用超過100種細(xì)胞系進(jìn)行基因編輯，編輯過的基因大于4000個，涵蓋20種以上不同組織。

Horizon的基因診斷標(biāo)準(zhǔn)品的制作過程：首先對野生型細(xì)胞株進(jìn)行單克隆稀釋，得到基因背景相對一致的Horizon野生細(xì)胞株。在此基礎(chǔ)上采用基因編輯平臺做出相對應(yīng)的單克隆突變細(xì)胞株。得到的這一對的細(xì)胞株(野生型+等位基因人工變異的細(xì)胞株)基因背景完全一致，唯一的差別僅僅在于基因編輯所引入的這個突變。通過改變野生型和突變型細(xì)胞株的比例，可以混合出任何不同等位基因頻率的標(biāo)準(zhǔn)品，提供完美的濃度梯度。該標(biāo)準(zhǔn)品的發(fā)明被譽(yù)為基因檢測領(lǐng)域的金標(biāo)準(zhǔn)，還獲得2013年歐洲科學(xué)家雜志的全球十大發(fā)明獎。

紐約州指導(dǎo)文件針對NGS的管理法案中“標(biāo)準(zhǔn)品的使用”部分有一系列的要求，包括精確的數(shù)量、精確的等位基因頻率以及對腫瘤樣本的精確反映。 人工合成核苷酸(Synthetic oligos)、 混合的野生細(xì)胞系 (Cell line mixtures)、病人樣本 (Primary tissue samples)、 嵌入人工合成核苷酸的野生細(xì)胞系 (Synthetic oligos spiked into cell DNA)等都不能達(dá)到以上的標(biāo)準(zhǔn)。Horizon的基因標(biāo)準(zhǔn)品解決了這一基因檢測領(lǐng)域的難題，使我們能夠真正了解測試的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。精確定義、定量，并且高度穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)品是目前業(yè)界最為需要的參考標(biāo)準(zhǔn)。

目前，實(shí)驗(yàn)室使用基因測試方法不同且沒有統(tǒng)一參考標(biāo)準(zhǔn)。歐洲基因測試質(zhì)量考核中心2011年的測試數(shù)據(jù)曾表明各個實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)方法不一，結(jié)果不統(tǒng)一、假陽性和假陰性問題頻繁。而我國情況更為嚴(yán)重。 如上文所說，中國KRAS 檢測錯誤率達(dá)到45%，與歐洲國家的4-5%以上有很大差別。標(biāo)準(zhǔn)品的引進(jìn)和使用在某種程度上對基因檢測準(zhǔn)確率的提高有著不可忽視的作用。希望國外的先進(jìn)技術(shù)和經(jīng)驗(yàn)?zāi)軌蛟缛兆哌M(jìn)中國，使基因檢測行業(yè)早日走上正軌，迎來更快更好的發(fā)展!

Horizon Discovery是一家總部位于英國劍橋的跨國生物科技公司。公司成立于2005年，是一個創(chuàng)新主導(dǎo)的科技公司。Horizon的技術(shù)核心是基因編輯技術(shù)，至今已經(jīng)有超過十年基因編輯經(jīng)驗(yàn)。從早期的rAAV技術(shù)到ZFN、CRISPR，Horizon都有專利授權(quán)。目前，Horizon憑其世界一流的技術(shù)，為全球50個國家的超過1000個專業(yè)機(jī)構(gòu)客戶提供產(chǎn)品和服務(wù)以及研發(fā)合作。公司服務(wù)于生命科學(xué)相關(guān)的學(xué)術(shù)界、科技公司、診斷公司、醫(yī)藥公司等不同領(lǐng)域。Horizon大大推進(jìn)了個體化醫(yī)療和精準(zhǔn)醫(yī)療的發(fā)展。Horizon致力于在這場個體化醫(yī)療的革命中通過增加對疾病在基因水平上的認(rèn)識為病人帶來更好的診斷和治療結(jié)果以及實(shí)現(xiàn)醫(yī)療保健資源。