組織源性原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室組建的基本要求

一、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)

1、細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。
 
2、細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計(jì)原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。
 
3、細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計(jì)原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，為10萬級潔凈環(huán)境的潔凈室。而洗刷消毒工作設(shè)在潔凈室外，避免物品污染潔凈室內(nèi)環(huán)境。細(xì)胞潔凈室需要一個空調(diào)系統(tǒng)并對外界保持一定的正壓。
 
4、解剖實(shí)驗(yàn)室主要用于對器官組織的分離，需要有無菌操作臺、解剖顯微鏡、各種手術(shù)器材等。
 
二、實(shí)驗(yàn)室設(shè)備

1、超凈工作臺/生物安全柜

細(xì)胞培養(yǎng)需要無菌要求高的環(huán)境，在進(jìn)行操作細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)時，需要在100級的空氣下進(jìn)行，那我們就需要購買能提供百級潔凈度的超凈工作臺或生物安全柜了。

對絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)來說，超凈工作臺已經(jīng)可以完全滿足實(shí)驗(yàn)員的操作需要。至于超凈臺的尺寸，要看實(shí)驗(yàn)室的大小以及人員的多少來確定，是買單人的還是雙人的，是買單面的還是雙面的，以及買幾臺等等。如果操作的實(shí)驗(yàn)具有生物危險性，則應(yīng)選擇較之超凈臺更加高級的生物安全柜。安全柜和超凈臺在使用上沒有多大區(qū)別，但是安全柜對人員具有保護(hù)，適用于那些對人體有害的病毒或細(xì)胞細(xì)菌等實(shí)驗(yàn)。需要說明的是，超凈臺或安全柜的擺放應(yīng)當(dāng)避開房門，空調(diào)等擾動附近氣流的地方。
 
2、二氧化碳培養(yǎng)箱

細(xì)胞培養(yǎng)所用的緩沖體系是碳酸氫鈉+HEPES體系，所以需要二氧化碳提供緩沖能力維持pH。這時我們就需要一個二氧化碳培養(yǎng)箱來對細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。并且由于二氧化碳培養(yǎng)箱通常不具有制冷壓縮機(jī)，所以需要用戶確定其細(xì)胞房內(nèi)在夏天也有全天候的空調(diào)制冷，否則會造成箱內(nèi)溫度超標(biāo)。另外二氧化碳培養(yǎng)箱也分為氣套式和水套式，所謂的氣套式就是直接的電熱絲加熱，箱體升溫較快，但是溫度精度及保溫效果會稍差；而水套式則利用浸泡在水中的電熱絲加熱包裹在箱體內(nèi)膽外的水套來達(dá)到控溫的效果，其升溫慢但是保溫的效果良好，即使短時間發(fā)生斷電也不怕影響箱體內(nèi)的細(xì)胞生長。
 
3、倒置顯微鏡

需要倒置顯微鏡的幫助。對于一些熒光免疫細(xì)胞實(shí)驗(yàn)（IF），則還需要購買倒置的熒光顯微鏡。
 
4、純水機(jī)/超純水機(jī)

細(xì)胞培養(yǎng)還需要超純水系統(tǒng)，普通的純水和蒸餾水是無法用于細(xì)胞培養(yǎng)的，而超純水主要用于配置一些培養(yǎng)基和試劑，超純水的進(jìn)水可為自來水或二級純水（質(zhì)量好些的去離子水，電阻10兆歐左右），細(xì)胞培養(yǎng)用水除了超純以外，最主要對內(nèi)毒素有嚴(yán)格的要求，所以在挑選超純水機(jī)的時候就要挑選含超濾組件的機(jī)型。
 
5、離心機(jī)

細(xì)胞培養(yǎng)需要離心收集傳代細(xì)胞，一般轉(zhuǎn)速在1000轉(zhuǎn)到1500轉(zhuǎn)之間，所以需要購買低轉(zhuǎn)速的常溫離心機(jī)，而且要帶10ml，50ml及培養(yǎng)板的轉(zhuǎn)子。另外還需要一臺高速冷凍離心機(jī)用于收集細(xì)胞沉淀或細(xì)胞上清。
 
6、液氮罐

建立一個細(xì)胞庫，液氮罐就是必須的，放入液氮罐內(nèi)的凍存細(xì)胞一般可以保證在近十年的時間內(nèi)都具有生物活性，至于需要多大的液氮罐要根據(jù)細(xì)胞庫的大小而定。
 
7、低溫冰箱

細(xì)胞在凍存時需要存放-70到-80度過夜再放入液氮罐，這樣則需要一個低溫冰箱。
 
8、傳遞窗

細(xì)胞房在構(gòu)建時要與外界隔絕，這樣就需要購買傳遞窗來傳遞物品，減少污染的幾率，并且將所有進(jìn)入細(xì)胞室的物品都在傳遞窗內(nèi)進(jìn)行紫外殺菌，可以保證潔凈室的安全。
 
9、高壓滅菌鍋

各類細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室器皿在使用前后都需要做滅菌處理，滅菌條件一般為121℃，20～30分鐘，這樣就需要一臺放置在潔凈室外的高壓滅菌鍋來保障生物安全性。
 
10、移液槍，電動移液槍

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)操作時，需要使用各種吸頭及移液管，所以配置移液槍是必要的。
 
11、細(xì)胞培養(yǎng)中需要的各種耗材各類細(xì)胞培養(yǎng)板，細(xì)胞培養(yǎng)瓶，平皿移液管等。
 
12、其余儀器

對于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)還可能需要振蕩器及磁力攪拌器用于混勻液體；還有一些沾滿細(xì)胞的難清洗的不銹鋼類或玻璃類器皿，則需要超聲波清洗機(jī)的幫助；如果涉及免疫實(shí)驗(yàn)，肯定需要冰浴，碎冰的需求量大的話，則需要購買制冰機(jī)；另外破碎細(xì)胞可能會需要超聲波細(xì)胞破碎儀；最后需提及的是如果細(xì)胞房較大，則要配備手推車，實(shí)驗(yàn)時搬動那些液體培養(yǎng)基總是件折磨人的事情。

原生原代提示：請用專業(yè)性原代細(xì)胞培養(yǎng)體系，這樣使您的原代細(xì)胞分離、培養(yǎng)、傳代、凍存、復(fù)蘇的成功率大大提高。