腫瘤組織源性的原代細胞培養(yǎng)

一、腫瘤細胞培養(yǎng)的概述        

腫瘤細胞的原代培養(yǎng)與正常細胞的原代培養(yǎng)的條件基本相似。一般常用腫瘤原代細胞培養(yǎng)基礎培養(yǎng)基、5～10%血清濃度、細胞培養(yǎng)添加劑、抗生素等等即可�；蛟谠�代培養(yǎng)時需加入原代細胞培養(yǎng)的特制添加物，或原患者血清（1~2%）以利細胞生長。用細胞生長因子如胰島素、氫化可的松、雌激素等等。也可以考慮動物媒介培養(yǎng)。

二、腫瘤細胞的十大生物學特征

自給自足生長信號（Self-Sufficiency in Growth Signals）；
抗生長信號的不敏感（Insensitivity to Antigrowth Signals）；
抵抗細胞死亡 (Resisting Cell Death)；
潛力無限的復制能力 (Limitless Replicative Potential)；
持續(xù)的血管生成 (Sustained Angiogenesis)；
組織浸潤和轉(zhuǎn)移 (Tissue Invasion and Metastasis)；
避免免疫摧毀 (Avoiding Immune Destruction)；
促進腫瘤的炎癥（Tumor Promotion Inflammation）；
細胞能量異常（Deregulating Cellular Energetics）；
基因組不穩(wěn)定和突變（Genome Instability and Mutation）；

三、腫瘤細胞分離和培養(yǎng)的基本方法

根據(jù)細胞種類不同選用不同的促細胞生長因子。腫瘤組織分離為腫瘤細胞原代培養(yǎng)的方法主要有組織塊法、酶消化法、鉭網(wǎng)法、脫落細胞法等。

1、組織塊法
將取得的瘤組織去除脂肪、結締組織及壞死部分，在平皿中用Hanks液洗3次，剪碎組織，切成1~2mm3小塊，接種于培養(yǎng)瓶（或皿）中，370C、5%CO2或加蓋并塞在普通恒溫箱中培養(yǎng)。

2、酶消化法
在剪碎組織，切成1~2mm3小塊中，加入0.25%胰蛋白酶或2000U/ml膠原酶，在370C水浴中消化30min或更長一些，去除消化液，用洗液洗3次，培養(yǎng)基洗1次后，用完全培養(yǎng)基懸浮，并用吸管吹打分散制成細胞懸液，計數(shù)。以（5~10）x108個/L細胞濃度，在專業(yè)性原代腫瘤細胞完全培養(yǎng)體系中，370C、5% CO2下分瓶（或皿）中培養(yǎng)。

3、鉭網(wǎng)法
在一張面積約為1cm2的鉭網(wǎng)上放入上述剪碎的一塊或幾塊腫瘤組織塊（1~2mm3大�。�，用鑷子輕壓，使其粘于網(wǎng)上，再把鉭網(wǎng)放入培養(yǎng)皿中，使網(wǎng)下的組織塊與皿壁緊緊接觸， 在專業(yè)性原代腫瘤細胞完全培養(yǎng)體系中，于370C、5% CO2下培養(yǎng)，每隔2~3天換液一次，5天后可見細胞從網(wǎng)上移出，并能在相當于腫瘤組織部位形成純凈的單層腫瘤細胞。

4、脫落細胞法
將新鮮的腫瘤組織去除脂肪和結締組織后，洗液洗2次，用刀片將腫瘤組織切成細薄片，在切割的同時有許多腫瘤細胞脫落下來，脫落細胞經(jīng)洗滌后，加入完全培養(yǎng)基，便可獲得較純的上層細胞在專業(yè)性原代腫瘤細胞完全培養(yǎng)體系中，于培養(yǎng)瓶（或皿）中，370C、5% CO2下培養(yǎng)，每隔2-3天換液一次，7-10天腫瘤細胞逐漸長成單層。

記�。�
1、全程操作和周圍環(huán)節(jié)一定要嚴格無菌，污染可能伴隨原代細胞分離、培養(yǎng)、凍存、復蘇、運輸?shù)鹊哪骋画h(huán)節(jié)或整個環(huán)節(jié)中，污染一定是原代細胞培養(yǎng)失敗的頭號問題。

2、 一定要用專業(yè)性、配套的原代細胞完全培養(yǎng)體系。在原代細胞分離和第一代原代細胞培養(yǎng)用的原代細胞培養(yǎng)體系是該品種原代細胞培養(yǎng)的最好原代細胞培養(yǎng)體系。