如何選擇合適的濃縮離心管？

瀏覽次數(shù)：7691　發(fā)布日期：2017-8-15　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

一提起蛋白質(zhì)濃縮、更換緩沖液，我們都會(huì)想起超濾。這是一種我們都很熟悉的膜分離技術(shù)。它可用來(lái)分離溶液中極小的顆粒和溶解的分子。這種方法的最大特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，只需要濃縮離心管和離心機(jī)，即可圓滿完成我們的任務(wù)。

與層析、透析等方法相比，超濾對(duì)被處理的分子更加溫和。它不需要有機(jī)萃取，就不會(huì)導(dǎo)致蛋白變性。這種方法非常高效，可同時(shí)濃縮和純化分子。操作可在低溫（比如冷庫(kù)）下進(jìn)行。另外，快速、便宜，也是許多人青睞它的原因。

濃縮離心管的操作很簡(jiǎn)單。選擇適當(dāng)?shù)臐饪s離心管，加入待處理的樣本，按照離心管的指示進(jìn)行離心操作，最后回收截留的樣本。在離心力的作用下，溶液中的小分子溶質(zhì)和溶劑透過(guò)超濾膜，被收集在濾過(guò)液收集瓶中，而大分子溶質(zhì)被超濾膜截留在濃縮離心管中。這種分離的主要依據(jù)是分子大小，但分子形狀和電荷等其他因素也會(huì)有影響。

一般來(lái)說(shuō)，超濾的回收率可達(dá)90%以上。樣本損失大多是由于濾膜表面和容器表面的非特異性吸附引起的。因此，選擇口碑好、高品質(zhì)的濃縮離心管非常重要。Pall作為過(guò)濾方面的老牌公司，提供了多種濃縮離心管，可對(duì)50 μl到60 ml的樣本進(jìn)行高效的濃縮和脫鹽。它配備了Omega（改良的聚醚砜）膜，確保低的非特異性吸附和高的回收率。當(dāng)然，這個(gè)的前提是你選對(duì)了濃縮離心管。

如何選擇濃縮離心管

1. 按體積

Pall提供了4個(gè)系列的濃縮離心管，適合處理不同體積的樣本。你可以根據(jù)你的樣本量來(lái)選擇。不過(guò)，如果樣本濃度低體積大，可以選擇較小容積的濃縮離心管多次重復(fù)加樣離心。

產(chǎn)品	樣本體積
Nanosep® 濃縮離心管	< 0.5 mL
Microsep™ Advance 濃縮離心管	0.5-5.0 mL
Macrosep® Advance 濃縮離心管	5-20 mL
Jumbosep™ 濃縮離心管	20-60 mL

2. 選擇適當(dāng)?shù)慕亓舴肿恿浚∕WCO）

一旦樣本體積確定，下一步就是選擇適當(dāng)?shù)腗WCO。對(duì)于蛋白質(zhì)而言，建議所選濾膜的MWCO是欲截留分子大小的1/6-1/3。通常，截留孔徑越小，流速越慢，但截留比例更大。因此，如果流速是主要的考慮因素，建議選擇MWCO為1/3的濾膜；如果重點(diǎn)考慮截留比例，那么最好選擇更致密的膜。

友情提示一下，超濾膜對(duì)分子的截留是由多個(gè)因素決定的。在截留分子量之外，你還有必要考慮分子形狀、電荷、樣本濃度、樣本組成及操作條件。也許，線性的DNA分子溜走了，而球狀的分子卻被保留下來(lái)�？傊�，根據(jù)下表來(lái)選擇MWCO就基本沒(méi)錯(cuò)了。為了防止大家拿錯(cuò)管子，Pall還貼心地將不同MWCO的濃縮離心管設(shè)置成不同的顏色，以方便識(shí)別。

核酸應(yīng)用的MWCO選擇

MWCO	堿基對(duì)（雙鏈）	堿基（單鏈）
3K	16-32 bp	32-65 bs
5K	25-50 bp	50-95 bs
10K	50-145 bp	95-285 bs
30K	145-285 bp	285-570 bs
50K	240-475 bp	475-950 bs
100K	475-1450 bp	950-2900 bs
300K	1450-2900 bp	2900-5700 bs
1000K	4800-9500 bp	> 9500 bs

蛋白應(yīng)用的MWCO選擇

MWCO	膜額定的孔徑大小	生物分子的大小	生物分子的分子量
3K	-	-	10K-20K
5K	-	-	15K-30K
10K	-	-	30K-90K
30K	-	-	90K-180K
50K	5 nm	15-30 nm	150K-300K
100K	10 nm	30-90 nm	300K-900K
300K	35 nm	90-200 nm	900K-1800K
1000K	100 nm	300-600 nm	> 3000K

濃縮離心管的應(yīng)用

濃縮

這是大家都很熟悉的應(yīng)用。超濾可很方便地濃縮經(jīng)過(guò)稀釋的蛋白質(zhì)或DNA/RNA樣本。它很溫和，不會(huì)打斷長(zhǎng)達(dá)100 kb的DNA，也不會(huì)導(dǎo)致蛋白酶活的損失，同時(shí)也很高效，回收率通常高于90%。

之前，美國(guó)McGuire VA medical Center的Katrina Stumpf曾與我們分享了她使用Microsep濃縮離心管的經(jīng)驗(yàn)。她利用這些裝置來(lái)濃縮一種小肽。操作過(guò)程中，她發(fā)現(xiàn)甘油了影響濃縮。之后，她先使用MWCO較大的裝置，接著將濾過(guò)液加到MWCO較小的裝置上。雖然耗時(shí)長(zhǎng)一些，但是順利完成了濃縮任務(wù)。她認(rèn)為Microsep濃縮離心管簡(jiǎn)便易用，操作手冊(cè)詳細(xì)，信息量大。

脫鹽和緩沖液交換

超濾帶來(lái)了一種方便而高效的方法，可去除和交換溶液中的鹽、去除變性劑、分離復(fù)合分子、去除低分子量組分，或者快速改變離子或者pH環(huán)境。比如在用兩種或兩種以上的限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切時(shí)，有時(shí)找不到通用的酶切緩沖液，就可以借助濃縮離心管，更換緩沖液。

組分分離

當(dāng)然，超濾無(wú)法完全分離兩種分子量接近的分子。為了有效分離，待分離分子的分子量至少要相差一個(gè)數(shù)量級(jí)（10X）。對(duì)于PCR產(chǎn)物的純化和回收，超濾就很適合。PCR反應(yīng)混合物里含有多種鹽、游離的核酸、甘油、蛋白和引物，因此大多數(shù)的下游應(yīng)用都要求對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行某種純化。超濾的方法快速，操作少，產(chǎn)率高，也不損傷DNA。

最后提醒一下，濃縮離心管是一次性的工具，不建議重復(fù)使用。不過(guò)，由于價(jià)格不便宜，有些研究人員也嘗試重復(fù)使用。他們的經(jīng)驗(yàn)是，用于同一樣本，至少兩次沒(méi)問(wèn)題，用完之后用蒸餾水沖洗一下，并保存在20%的酒精中。不過(guò)，這只是個(gè)人經(jīng)驗(yàn)，僅供參考哦。（

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