293A（人胚腎細(xì)胞）復(fù)蘇、傳代和凍存方案【通過STR鑒定】

293A（人胚腎細(xì)胞）【通過STR鑒定】

規(guī)格：1×10⁶cells/T25培養(yǎng)瓶

一、 復(fù)蘇
1. 把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
2. 把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中（用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來），1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
3. 把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。
4. 標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。
5. 3天換一次培養(yǎng)基。
二、 傳代
1. 培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時要傳代。
2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。
3. 加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌福�能覆蓋細(xì)胞就行），消化1-2分鐘。
4. 細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。
5. 用移液槍吹打細(xì)胞，把細(xì)胞都懸浮起來。
6. 把細(xì)胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。
7. 倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來。
8. 根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個，正常細(xì)胞傳3個。繼續(xù)培養(yǎng)。
三、  凍存
把細(xì)胞消化下來并離心（同上）。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細(xì)胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。 
凍存液的配制： 70%的完全培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。
要注意的就是無菌操作！