鏈霉親和素磁珠（SA magnetic bead）產(chǎn)品性能比較研究

 磁性聚合物微球兼具高分子微球特性和磁響應(yīng)性，因此，廣泛應(yīng)用于靶向給藥、生物診斷、催化劑制備、磁成像等領(lǐng)域。目前，大部分的生物分子是通過(guò)表面的氨基或者羧基與磁性微球表面的基團(tuán)共價(jià)結(jié)合的方式直接固定化在磁性微球的表面。這種方法不僅復(fù)雜，還會(huì)使固定化的生物分子活性受到較大影響，例如抗體可能會(huì)失去與抗原的特異性結(jié)合的能力。同時(shí)，會(huì)限制磁性微球的應(yīng)用范圍。
      生物分子很容易被生物素共價(jià)附著修飾，且被附著的生物分子在活性上上幾乎沒(méi)有損失�；罨�的生物素可以與已知的幾乎所有生物分子偶聯(lián)，包括蛋白質(zhì)，核酸，多糖，脂類等。目前很多市售的生物分子，例如抗體，酶，蛋白質(zhì)，核酸等均被生物素修飾。修飾了生物素的生物分子，可以被固定化鏈霉親和素的磁性微球直接吸附，一個(gè)鏈霉親和素分子能結(jié)合４個(gè)生物素分子，因此可以實(shí)現(xiàn)多級(jí)放大效應(yīng)，且鏈霉親和素與生物素之間的親和作用，是目前已知強(qiáng)度最高的非共價(jià)作用，其結(jié)合穩(wěn)定，不受離子強(qiáng)度，酸堿性等不良環(huán)境的影響，同時(shí)方法簡(jiǎn)單，應(yīng)用范圍更加廣泛。
      鏈霉親和素磁性微球能快速捕捉反應(yīng)液中生物素修飾的分子，在抗體和核酸偶聯(lián)應(yīng)用中具有快速簡(jiǎn)單的獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，是生物診斷中最常用的親和捕獲磁珠。市場(chǎng)上的鏈霉親和素磁珠產(chǎn)品質(zhì)量良莠不齊，不同廠家產(chǎn)品在測(cè)定其游離生物素結(jié)合能力時(shí)所采用方法的差異使不同產(chǎn)品難以比較。

      本文采用熒光生物素的方法測(cè)定了市場(chǎng)主流進(jìn)口鏈霉親和素磁性微球產(chǎn)品結(jié)合游離生物素能力。

      磁性微球對(duì)生物素親和檢測(cè)的機(jī)理如圖所示。

      分別取200 μL、400 μL、600 μL、800 μL、1200 μL、1600 μL、2000 μL、3000 μL、4000 μL、6000 μL、8000 μL、10000 μL的SA磁性微球(0.1 mg/mL)加入到2 mL離心管中，磁分離，加入100 μL的50 mM的pH 8的三乙醇胺緩沖液。加入1 mL的1 μM的熒光生物素(BF)溶液，避光，室溫下震蕩30 min。磁分離，取1 mL上清，用熒光分光光度計(jì)測(cè)量熒光，其激發(fā)波長(zhǎng)為494 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為520 nm。對(duì)生物素吸附量的由公式(1)與公式(2)求得：
      BF_b=(1-(sample fl.)/(blank fl.))× BF0        （1）
      W=(BFb×1  mL)/(0.1 mg)       （2）
      式中sample fl.和blank fl.分別為樣品的熒光值和空白對(duì)照的熒光值；BF0與BFb分別為初始與磁性微球消耗的熒光生物素的濃度，單位為μM；W為磁性微球對(duì)熒光生物素的吸附量，單位pmol/mg。

      經(jīng)檢測(cè)后結(jié)果，如下圖所示：

由圖可知，PuriMag和Bangs的鏈霉親和素磁珠檢測(cè)的結(jié)果明顯高于其它同類產(chǎn)品，其中PuriMag的鏈霉親和素磁珠約是Dynal的5倍，表現(xiàn)優(yōu)異。Sphero、Dynal、Scipac、Cortex的產(chǎn)品性能相近。分析該結(jié)果，其主要原因可能是各家產(chǎn)品表面包覆的鏈霉親和素有顯著差異，此外各家磁珠的尺寸不同，亦會(huì)導(dǎo)致這種差異。PuriMag的磁珠為直徑200nm，其比表面積顯著大于直徑1um或2.8um的磁珠。由于尺寸較小，PuriMag的磁珠懸浮性亦明顯由于其它產(chǎn)品。