臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞傳代培養(yǎng)方法

Sciencell公司的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（貨號(hào)#8000、HUVEC）是科研實(shí)驗(yàn)中常用到的內(nèi)皮細(xì)胞，當(dāng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞達(dá)到80-90%融合時(shí)，需要對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

傳代培養(yǎng)方法：

1.準(zhǔn)備培養(yǎng)瓶：用纖維粘連蛋白（貨號(hào)#8248、BPF）以2ug/cm2包被培養(yǎng)瓶，包被時(shí)間為37度一小時(shí)或4度過(guò)夜。將培養(yǎng)基（貨號(hào)#1001、ECM）、胰酶中和液（貨號(hào)#0113、TNS）、胰酶/EDTA消化液（貨號(hào)#0103、T/S）和無(wú)鈣鎂離子的磷酸鹽緩沖液（貨號(hào)#0303、DPBS），溫度恢復(fù)至室溫，我們不推薦用37°C水浴加熱試劑和培養(yǎng)基。
2.胰酶消化：棄去原培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，用10mlDPBS沖洗人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，然后加入2ml胰酶消化液。輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以至胰酶消化液覆蓋所有人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。如果使用ScienCell實(shí)驗(yàn)室的胰酶/EDTA消化液，會(huì)把胰酶消化對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的損害減少到最低。

3.終止消化：將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱中1-2分鐘，在孵化后期，輕輕拍打培養(yǎng)瓶以使臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞脫離瓶壁。顯微鏡下觀察臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)變化，直至80%臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞變圓。然后立即加入10ml胰酶中和液并輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)瓶。

4.細(xì)胞收集：收集人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞并將其轉(zhuǎn)入50ml離心管中。再加入10ml培養(yǎng)基沖洗培養(yǎng)瓶以確保收集所有的殘余臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。在顯微鏡下觀察培養(yǎng)瓶中剩余臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的數(shù)量以確定是否將臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞大部分收集，剩余臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)應(yīng)小于5%。

5.離心重懸：以1000轉(zhuǎn)/分（1000rpm)離心收取的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞5分鐘，棄去上清，在新加的培養(yǎng)基中重懸臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。

6.鋪板培養(yǎng)：對(duì)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞計(jì)數(shù)，然后將它們接種到新的纖維粘連蛋白包被過(guò)的培養(yǎng)瓶中，37度培養(yǎng)即可。電話13683626447