瘦素elisa試劑盒操作技巧

       瘦素elisa試劑盒應(yīng)用于雙抗體夾心法測定標本中人瘦素（leptin）水平。用純化的人瘦素（leptin）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入瘦素（leptin），再與HRP標記的瘦素（leptin）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的瘦素（leptin）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人瘦素（leptin）濃度。
操作技巧：
1、血清：操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
3、血漿：EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。
5、脫鎂葉綠素a氧化酶酶免ELISA試劑盒保存：如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
操作注意事項
1、當混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。
2、請每次測定的同時做標準曲線，zui好做復孔。
3、一次加樣時間zui好控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4、洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
5、如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
6、底物請避光保存。
7、在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。