菌株分離培養(yǎng)特性研究結(jié)果分析

1.菌株分離培養(yǎng)特性和鏡檢
        剖檢觀察病死羔羊肺臟組織，肉眼可見(jiàn)肺臟大部分呈現(xiàn)肉變，并伴有白色化膿灶。分離菌株在綿羊血瓊脂平板上生長(zhǎng)為均一的灰白色、邊緣光滑、濕潤(rùn)的圓形菌落，革蘭氏染色呈現(xiàn)陰性短小桿菌。
2. 分離菌株生化特性
      經(jīng)細(xì)菌生化鑒定儀鑒定，分離株與大腸桿菌的生化反應(yīng)特點(diǎn)一致，包括不產(chǎn)生氧化酶、苯丙氨酸脫氨酶、DNA酶以及硫化氫；能產(chǎn)生賴氨酸脫羧酶；分解乳糖，但不利用檸檬酸鹽、D-阿東醇和纖維二糖等，是大腸桿菌的可信度為99% (表 2)。在麥康凱平板上生長(zhǎng)為紅色、濕潤(rùn)圓形菌落；在伊紅美蘭平板上生長(zhǎng)為黑色帶有金屬光澤圓形菌落；革蘭氏染色鏡檢為陰性桿菌。
3. 分離株16S rRNA基因鑒定結(jié)果
    以細(xì)菌DNA為模板，PCR擴(kuò)增大腸桿菌16S rRNA基因序列，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)分離株擴(kuò)增出202 bp大小的目的條帶(圖 2)。將測(cè)序序列與GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)E. coli參考株16S rRNA基因序列進(jìn)行同源性比對(duì)。結(jié)果顯示，分離株16S rRNA基因序列與E. coli參考株CP020933.1、KY906967.1、LC259015.1等相似性均為99%以上。
4. 分離株致病性試驗(yàn)結(jié)果
         試驗(yàn)組小鼠感染后雙目緊閉，被毛潮濕雜亂，呈腹式呼吸，瀕死小鼠表現(xiàn)為全身顫抖，6 h內(nèi)全部死亡(100%)，而對(duì)照組小鼠無(wú)死亡。剖檢發(fā)現(xiàn)死亡小鼠肝臟腫大，邊緣有出血點(diǎn)，脾臟腫大變黑，肺臟充血及出血，局部出現(xiàn)壞死。無(wú)菌采集小鼠肺臟、肝臟、脾臟，均分離到與注射菌一致的大腸桿菌。
5. 藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果
    按CLSI標(biāo)準(zhǔn)判斷分離菌株對(duì)青霉素、阿莫西林、頭孢拉定、鏈霉素、慶大霉素、多西環(huán)素、麥迪霉素、氟苯尼考、諾氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星、復(fù)方新諾明、阿奇霉素和克林霉素等14種抗生素耐藥；對(duì)頭孢唑啉、丁胺卡那和多粘菌素B中度耐藥；對(duì)頭孢他啶、頭孢哌酮、氧氟沙星和米諾環(huán)素敏感。
6. ExPEC毒力因子擴(kuò)增結(jié)果
    以細(xì)菌DNA為模板，對(duì)9種ExPEC毒力因子進(jìn)行PCR檢測(cè)，擴(kuò)增到iutA (314 bp)、fyuA (787 bp)和ireA (254 bp) ，且擴(kuò)增片段序列與GenBank參考序列的相似性大于99%。未檢測(cè)到papA、sfaS、focG、hlyD、afa和vaT等基因。
7. 病理組織學(xué)觀察結(jié)果
    病死羔羊肺臟支氣管管腔充血，淋巴管擴(kuò)張，周圍淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、增生，肺臟肺泡壁毛細(xì)血管充血，肺泡腔內(nèi)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；人工感染小鼠肺臟肺泡腔內(nèi)充滿滲出物，出現(xiàn)肺泡性肺氣腫，肺臟血管管腔充血，淋巴細(xì)胞增生，肺泡周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。