淺析細(xì)胞體外培養(yǎng)的三大污染原因

細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是離體方法中主要的一種，是從動(dòng)物體內(nèi)取出細(xì)胞，模擬體內(nèi)的生理環(huán)境，在無菌、適溫、豐富的營(yíng)養(yǎng)條件下，使離體細(xì)胞生存、生長(zhǎng)并維持結(jié)構(gòu)和功能的一門技術(shù)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)是科學(xué)探究的基礎(chǔ)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)可以提供包括細(xì)胞侵襲檢測(cè)、細(xì)胞劃痕檢測(cè)以及細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)等的研究。細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)對(duì)于科學(xué)研究至關(guān)重要，然而在細(xì)胞培養(yǎng)中，常會(huì)因?yàn)椴贿m宜的環(huán)境條件以及不得當(dāng)?shù)牟僮鲗?dǎo)致細(xì)胞被污染。在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中如何避免污染是一項(xiàng)很重要的工作，現(xiàn)在我們來看一下細(xì)胞體外培養(yǎng)中常見的污染種類，以及避免方法。
1、外源性污染
外源性污染中應(yīng)注意實(shí)驗(yàn)室內(nèi)空氣保持潔凈，定期清掃、紫外消毒，操作者嚴(yán)格按照無菌操作進(jìn)行。由于離體細(xì)胞對(duì)各種毒物都很敏感，所以細(xì)胞培養(yǎng)所用器材的清洗、消毒處理非常關(guān)鍵。
培養(yǎng)所用的物品器具要徹底清洗消毒，超凈臺(tái)的物品擺放要井然有序，避免反復(fù)燒烤已經(jīng)高溫滅菌的物品以及避免因細(xì)胞株種類過多而引起的細(xì)胞間交叉污染。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的構(gòu)建也是各個(gè)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)公司必備的實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室需要配備CO2培養(yǎng)箱、超凈工作臺(tái)/生物安全柜、純水系統(tǒng)以及液氮罐等設(shè)備，同時(shí)需要保證細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室的干凈與整潔。
2、支原體污染
支原體是一種沒有細(xì)胞壁的原核生物，大多呈不規(guī)則球狀或絲狀，由于它的直徑�。�約為0.15-2 µm），而且形狀靈活，所以能逃過實(shí)驗(yàn)室常用的濾膜。在光學(xué)顯微鏡下支原體不可見，對(duì)培養(yǎng)基的需求有限，一般不會(huì)引起培養(yǎng)物混濁，因此支原體像慢性毒藥一般殺細(xì)胞于無形之中。細(xì)胞被支原體污染后，其生長(zhǎng)繁殖和形態(tài)、代謝及功能、染色體及免疫細(xì)胞產(chǎn)量均會(huì)受到影響，支原體污染能夠消耗營(yíng)養(yǎng)物，促進(jìn)代謝積累，導(dǎo)致PH改變，誘導(dǎo)或抑制細(xì)胞因子表達(dá)，并改變培養(yǎng)細(xì)胞的代謝、增殖特征以及形態(tài)。
據(jù)一些資料報(bào)道，支原體污染在細(xì)胞體外培養(yǎng)過程中發(fā)生率高達(dá)15%~80%。為了避免支原體污染的發(fā)生，對(duì)培養(yǎng)物進(jìn)行常規(guī)的支原體檢測(cè)非常重要，應(yīng)嚴(yán)格按照細(xì)胞培養(yǎng)操作程序進(jìn)行操作、確保適宜的環(huán)境條件、嚴(yán)格的無菌觀念操作、定期清潔消毒、任何培養(yǎng)用液使用前均進(jìn)行無菌檢查、只引進(jìn)來源可靠的細(xì)胞，同時(shí)一旦發(fā)現(xiàn)污染的細(xì)胞應(yīng)滅活棄之避免進(jìn)一步污染擴(kuò)散。美迪西提供細(xì)胞實(shí)驗(yàn)服務(wù)，其生物部在分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、體外生物學(xué)和結(jié)構(gòu)生物學(xué)領(lǐng)域有豐富廣泛的經(jīng)驗(yàn)。從最初的cDNA文庫構(gòu)建到藥物設(shè)計(jì)，通過蛋白質(zhì)純化，結(jié)構(gòu)測(cè)定和分析測(cè)定，提供一套完整的生物學(xué)服務(wù)。
3、霉菌污染
霉菌污染也是細(xì)胞培養(yǎng)過程中常見的一個(gè)問題，如果細(xì)胞被霉菌污染后，在低倍鏡下可見乳白色的團(tuán)狀漂浮物，培養(yǎng)液無變化。高倍鏡下可見明顯的菌絲，細(xì)胞活力變差，生長(zhǎng)速度明顯變慢，甚至死亡。細(xì)胞被霉菌污染時(shí)，若非價(jià)值很高的珍貴細(xì)胞一般選擇扔掉，且相關(guān)的容器也要做嚴(yán)格處理。有文獻(xiàn)報(bào)道，低速離心法可去除細(xì)胞培養(yǎng)中的霉菌污染，不僅實(shí)驗(yàn)條件簡(jiǎn)單，能完全去除霉菌，且所用時(shí)間短．并能將不良反應(yīng)降至最低程度。
細(xì)胞體外培養(yǎng)中常見的污染種類除了上述之外，還有真菌、病毒原蟲等污染，不管是何種類型的污染，總之在細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，預(yù)防污染的最佳方法是良好的細(xì)胞培養(yǎng)技巧和正確的態(tài)度。同時(shí)在體外細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，還需要主動(dòng)避免細(xì)胞實(shí)驗(yàn)對(duì)人的影響。實(shí)驗(yàn)人員需要注意一些操作細(xì)節(jié)．如避免由于眼睛及皮膚長(zhǎng)時(shí)間暴露在紫外線下造成的損傷，同時(shí)避免由于誤照引起的電光性眼炎。紫外線燈在消毒時(shí)可產(chǎn)生刺激人體呼吸道黏膜的臭氧，臭氧過多時(shí)也會(huì)引起中毒反應(yīng)，所以為避免損傷出現(xiàn)應(yīng)使用無臭氧紫外線燈或在消毒完30分鐘后再進(jìn)入超凈工作室操作。