氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀GCMS在測(cè)酒中甜蜜素方向的應(yīng)用

概述：甜蜜素是食品生產(chǎn)中常用的甜味添加劑，其甜度是蔗糖的30～40倍,控制限量對(duì)人們的身體健康有重要意義�！禛B 2760-2014食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中用于界定食品添加劑使用范圍的食品分類系統(tǒng)，白酒屬于蒸餾酒，不允許使用甜蜜素。本方法參照GB/T 5009.97-2003及相關(guān)文獻(xiàn)資料，對(duì)白酒中的甜蜜素經(jīng)提取后，在冰浴條件下，與亞硝酸鈉發(fā)生重氮化反應(yīng)生成衍生物環(huán)己醇亞硝酸酯，衍生物進(jìn)入氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分離檢測(cè)。

1 實(shí)驗(yàn)部分
1.1  儀器與試劑
江蘇天瑞儀器股份有限公司氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：GC-MS 6800 甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液：稱取一定量的甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)品（純度為99.0％）于干燥容量瓶中，用水配成1000mｇ/kg標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。
試劑均為優(yōu)級(jí)純，試驗(yàn)用水為二次蒸餾水。

1.2  儀器工作條件
1.2.1  氣相色譜條件
DB-5毛細(xì)管色譜（30m ×0.25mm,0.25um）；載氣：氦氣（純度為99.999％），載氣流量1.0mL/min；進(jìn)樣口溫度250℃，進(jìn)樣量1.0uL，進(jìn)樣方式為分流進(jìn)樣,分流比10:1；程序升溫：初始溫度為40℃，保持時(shí)間10min，以25℃/min速率升至270℃，保持時(shí)間5min。

1.2.2  質(zhì)譜條件
電子轟擊離子源（EI），四級(jí)桿溫度150℃，接口溫度280℃；采集方式為選擇離子監(jiān)測(cè)掃描（SIM），溶劑延遲時(shí)間6min,選擇3個(gè)監(jiān)測(cè)離子質(zhì)荷比（m/z）為55,81,83。

1.3  實(shí)驗(yàn)方法（略）

2 結(jié)果與討論
2.1 特征和離子的選擇
甜蜜素的主要衍生物環(huán)己醇亞硝酸酯作為定性和定量，如圖1。保留時(shí)間8.511min.定性離子（m/z）為55,81,83。定量離子為55。質(zhì)譜圖見圖2.
2.2 前處理?xiàng)l件選擇
2.2.1 衍生時(shí)間選擇
準(zhǔn)確吸取的1ml甜蜜素儲(chǔ)備液溶液按照上述衍生步驟進(jìn)行衍生化，甜蜜素衍生物濃度為200ug/mL，衍生反應(yīng)時(shí)間分別設(shè)置為10min、20min、30min、40min、50min，考察反應(yīng)時(shí)間對(duì)反應(yīng)的影響。結(jié)果表明，隨著時(shí)間從10min升至30min，衍生物信號(hào)響應(yīng)值逐漸增加，隨著反應(yīng)時(shí)間的延長(zhǎng)，響應(yīng)值反而出現(xiàn)降低，因此，衍生反應(yīng)溫度30min最佳。

2.2.2  硫酸濃度的選擇
準(zhǔn)確吸取的1mL甜蜜素儲(chǔ)備液溶液按照上述衍生步驟進(jìn)行衍生化，甜蜜素衍生物濃度為200ug/mL，冰浴反應(yīng)條件下，加入50g/L的亞硝酸鈉和分別為50g/L，75g/L，100g/L，125g/L，150g/L。結(jié)果表明，酸度從50g/L至100g/L，反應(yīng)衍生物信號(hào)響應(yīng)值明顯增加，濃度升高時(shí)，響應(yīng)值出現(xiàn)減少，因此，最終衍生反應(yīng)酸度為100g/L。

2.2.3 亞硝酸鈉濃度對(duì)衍生反應(yīng)的影響
準(zhǔn)確吸取的1ml甜蜜素儲(chǔ)備液溶液按照上述衍生步驟進(jìn)行衍生化衍生化，甜蜜素衍生物濃度為200ug/mL，冰浴反應(yīng)條件下，加入100g/L的硫酸，和分別為30g/L，50g/L，70g/L，90g/L亞硝酸鈉。結(jié)果表明，酸度從30g/L至50g/L，反應(yīng)衍生物信號(hào)響應(yīng)值明顯增加，濃度升高時(shí)，響應(yīng)值出現(xiàn)減少，因此，最終亞硝酸鈉衍生反應(yīng)為50g/L。

3 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
3.1  精密度和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
準(zhǔn)確移取儲(chǔ)備液500uL于離心管中，用水定容20mL按照上述標(biāo)樣衍生步驟進(jìn)行衍生化，衍生物濃度為100ug/mL，平行制備反應(yīng)液6次，用GC-MS測(cè)定�？疾煅苌�方法的重現(xiàn)性以及組分保留時(shí)間和峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，6個(gè)平行樣的譜。結(jié)果表明，保留時(shí)間RSD為0.98%，峰面積RSD為6.00%,，具體實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下表1所示 。
3.2  線性關(guān)系和檢測(cè)限
準(zhǔn)確吸取濃度為10ug/mL的甜蜜素標(biāo)準(zhǔn)溶液10ul于50ml離心管中對(duì)應(yīng)衍生物濃度分別為2ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、100ug/mL、200ug/mL，按照上述標(biāo)樣衍生化步驟進(jìn)行衍生化，進(jìn)行線性測(cè)試。實(shí)驗(yàn)所得線性方程為：y=940.43x-3525.57，線性相關(guān)系數(shù)為0.9984，如圖5所示。 3.3 回收率測(cè)試
選擇2mg/kg、50mg/kg、200mg/kg的標(biāo)樣添加濃度，對(duì)某品牌白酒進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，每個(gè)濃度分別做三次平行樣，按處理樣品的方法處理加標(biāo)后的樣品并測(cè)試，采用外標(biāo)法定量，測(cè)試結(jié)果如下表2所示。
3.4 實(shí)際樣品測(cè)試
按照上述樣品處理方法對(duì)不同品類的白酒樣品進(jìn)行前處理和衍生化，使用GC-MS6800進(jìn)行測(cè)試，測(cè)試結(jié)果如下表3所示
 4 結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)采用GCMS-6800，在SIM掃描模式下對(duì)酒中的甜蜜素進(jìn)行測(cè)試和分析，方法穩(wěn)定可靠，線性范圍好，靈敏度高，受雜質(zhì)峰的干擾小，能夠有效地對(duì)酒中的甜蜜素進(jìn)行定性定量分析。